2024年 6月 22日, 星期六
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james

分子实验什么时候需要无菌操作?

什么时候使用无菌技术? 当必须进行无菌操作时。无论什么时候在进行活的有机体实验或是为进行活体实验而准备培养基、缓冲液、培养容器等时,必须使用无菌操作技术,例如: · 准备转化用的大肠杆菌培养物 · 制备LB 平板培养基 · 分装细胞 · 过滤培养基的血清 · 打开和溶解冻干细菌 在无菌操作有帮助的情况下。如果不想容器或是区域中的物质进入另一个容器或是区域时, …

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细胞周期测定实验有哪些,怎么做?

细胞计数法 实验方法原理:体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。 分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比,它是测定细胞周期的一个重要指标,也是不同实验研究选择细胞的重要依据。 实验步骤: 一、消化细胞,将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。 二、CO2培养箱中培养4 …

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如何构建siRNA表达载体?

siRNA表达载体构建可以:(1)作为后基因组时代基因功能分析的有力工具;(2)应用于基因组学、细胞信号传导通路分析;(3)用于药物靶点筛选、疾病治疗。 实验方法原理: 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段小的发夹RNA(shorthairpinRNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动 …

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为什么CRISPR没有成为目前基因治疗的首选技术?

CRISPR的热度在分子生物界持续了数年,而2020年的诺贝尔化学奖授予给了两位CRISPR的奠基者,更是将CRISPR的研究热潮推上了顶峰。 CRISPR实际是(clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats,成簇的有规律的间隔短回文片段)的简称。 1987年,科学家在大肠杆菌中发现了一段“ …

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siRNA转染答疑专题总结(下)

Q9: 刚开始做实验,准备把RNAi的片段转入染色体内稳定表达,不知道是shRNA还是siRNA哪个比较好而且效率比较高?另外,一个载体里同时放两个针对不同基因的shRNA会不会相互影响? A9: 稳定转染当然是shRNA。关于一个载体2个shRNA,涉及到2个shRNA的表达和加工的问题,关键还是2个shRNA都需要顺利表达的问题,这就和你的载体,以及2个 …

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siRNA答疑专题总结(上)

Q1:如果慢病毒载体中没有抗性标记,只有GFP,请问还能筛选稳转的细胞传代培养吗? A1:采用流式分选是流式细胞仪的一个功能,有流式细胞仪就可以了。一般实验室对流式都有专门的人员操作,不需要自己动手。由于没有抗性,需要注意分选过程的无菌操作。 Q2:RNA干扰如果用慢病毒做稳转的细胞株,什么样的目的RNA都可以用来干扰来做稳转的细胞株吗,目的RNA所编码蛋白 …

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细胞被污染了怎么办?

培养细胞一经污染,多数较难处理。如果污染细胞价值不大,宜弃之;在寻找原因后彻底消毒操作室,复苏或重新购置细胞,再培养。 若污染细胞价值较大,又难于重新得到,可采取以下办法清除。 一、细菌和真菌的清除   1、使用抗生素   抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素,污染后清除用药需采用大于常用量5 …

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