电转eag-miR-71进入绵羊PBMCs：一篇细粒棘球蚴外泌体miRNA免疫调节研究的实验解读

1. 研究背景与问题

囊型棘球蚴病（CE）是由细粒棘球蚴引起的人兽共患寄生虫病，对人和动物健康构成威胁。miRNA是一类参与寄生虫病致病过程的小非编码RNA，可能通过外泌体发挥作用。egr-miR-71已在CE患者血液中被鉴定为miRNA之一，但其分泌特征和功能尚不清楚。本研究聚焦外泌体egr-miR-71的分泌与生物学活性，以及其在绵羊外周血单核细胞（PBMCs）中的免疫调节功能。

2. 模型与分组

研究从三只健康绵羊中，采用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离PBMCs。每个样本设三个重复，实验独立进行三次。在电转染实验中，细胞分为两组：转染egr-miR-71 mimics（模拟物）组和转染阴性对照构建体组。

3. 本公司产品在这个实验里具体怎么用的

电转染部分使用Engreen的Entranster TME电转液。具体操作如下：取约1×10⁶个细胞，重悬于Entranster TME电转液中；将1.25 μL的egr-miR-71 mimics（100 nM）或阴性对照构建体（100 nM）加入每100 μL电转缓冲液中，混匀后加入4 mm间隙的电转杯；在150 V、25 μF、50 Ω条件下电转6 ms。电转后的样品立即置于含100 ng/mL LPS和10 ng/mL IFN-γ的RPMI-1640培养基中培养，并在转染后12 h和24 h收集细胞上清。

需要说明的是，miRNA mimics和阴性对照构建体并非本公司产品，本案例仅涉及Entranster TME电转液在电转染环节的使用。

4. 结果要点

研究显示，egr-miR-71在原头节分泌的外泌体中富集并具有生物学活性。含有egr-miR-71的外泌体容易被细胞内化，随后在共培养的绵羊PBMCs中引起细胞因子（IL-10和TNF-α）、一氧化氮（NO）以及LPS/TLR4通路关键组分（CD14和IRF5）的失调。类似地，egr-miR-71过表达也改变了免疫功能，但在细胞因子和关键组分的调节上表现出明显差异，更倾向于抑制促炎细胞因子（IL-1α、IL-1β和TNF-α）。这些结果表明，外泌体egr-miR-71具有生物学活性，并具备调节PBMCs免疫功能的能力，可能参与细粒棘球蚴感染过程中的免疫反应。

5. 这个案例对同类课题的参考价值

对于研究寄生虫来源miRNA免疫调节功能的研究生和技术员，本案例提供了几点参考：第一，使用电转染方法将miRNA mimics导入绵羊PBMCs是可行的，Entranster TME电转液在这一体系中完成了递送任务；第二，电转参数（150 V、25 μF、50 Ω、6 ms）和细胞数量（约1×10⁶）在依据中有明确记录，可作为类似原代免疫细胞电转实验的起点；第三，转染后12 h和24 h收集上清检测细胞因子，时间点设置紧凑，适合观察早期免疫应答变化。若您正在为不同细胞类型选择转染试剂，可参考英格恩的转染试剂选型指南，结合细胞特性与实验目的进行选择。

6. 文献出处

论文题目：Comparative characterization of microRNA-71 of Echinococcus granulosus exosomes.
DOI：10.1051/parasite/2023060

本文同步发表于微信公众号「英格恩生物」。

原文献页:英格恩官网文献页