2025年 6 月 15日, 星期日
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质粒被酶切过还可以电转吗?

可以,但得分情况来看:

如果质粒是线性化了(即被酶切成线状DNA):

可以电转,但是效率明显低于超级螺旋质粒(超螺旋 plasmid,通常是未切割、天然状态下的质粒结构)。

线性质粒在细胞内容易被核酸酶降解,稳定性和转化成功率比超螺旋质粒低很多。

有些时候,比如做基因组编辑(CRISPR knock-in)、整合型表达载体(需要基因组插入时),反而故意使用线性化的质粒。

如果质粒只是单纯打开了某个位点,但整体还保持闭环:

比如只切了一刀但是质粒仍然没有完全线性化(nick而不是full linearization),

那么电转通常问题不大,只是超螺旋比例变少,转化效率可能稍低,但还是可接受的。

影响因素总结
情况 能不能电转 效率 备注
超螺旋质粒(未切割) ✅ 很好 ⭐⭐⭐⭐⭐ 最佳
轻微 nick(小的开环) ✅ 可用 ⭐⭐⭐⭐ 稍降
完全线性化(被酶切断) ✅ 可用 ⭐⭐ 效率大降,易降解
多段切割(碎片化) ❌ 不推荐 ❌ 不能用

小Tips

如果只是想转回大肠杆菌扩增 plasmid,尽量使用未切割或重新回收超螺旋状态的质粒。

如果必须用线性DNA(比如做整合),可以提高DNA量、优化电转条件,增加转化效率。

电转时电击参数(电压、阻抗)对线性DNA更敏感,要小心不要打死细胞。

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