使用AUTOMACS 系统进行B 细胞的自动分选

材料

• 小鼠
• HBSS 洗涤缓冲液
• MACS 缓冲液
• CD45R（B220) 磁珠
• RPMI-10 完全培养基
• autoMACS 系统和分选柱
• 30μm 尼龙网(BD) 或40μm 预分离滤膜

步骤

1. 用2 只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞。
2. 将细胞在10ml HBSS 洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数 。
3. 将细胞悬液在4℃，200g 离心10 min。弃上清后将沉淀按每10⁸ 个细胞0. 9ml MACS 缓冲液的比例混悬。每10⁸ 个细胞加入0. 1ml CD45R (B220) 磁珠后在4°C 孵育15min 。
4. 按（用AUTOMACS 系统进行总T 细胞、CD4⁺细胞或CD8⁺ T细胞的自动分离）方案中的步骤4~7 操作，这样B 细胞将从阳性通道洗脱。