2022年 12月 6日, 星期二
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分子实验什么时候需要无菌操作?

什么时候使用无菌技术?

当必须进行无菌操作时。无论什么时候在进行活的有机体实验或是为进行活体实验而准备培养基、缓冲液、培养容器等时,必须使用无菌操作技术,例如:

· 准备转化用的大肠杆菌培养物
· 制备LB 平板培养基
· 分装细胞
· 过滤培养基的血清
· 打开和溶解冻干细菌

在无菌操作有帮助的情况下如果不想容器或是区域中的物质进入另一个容器或是区域时,应该使用无菌操作。无菌操作对于实验室中的许多操作都适用,即使在操作那些高盐和/或去污剂等不会长菌的缓冲液时,也要小心不要把手上或者移液头上的油脂和灰尘混入溶液中。

在操作有害制剂时,如放射性物质或有毒物质,应该使用无菌操作。这样首先是保护自己。有时必须改变一些实验操作过程,在你和试剂之间建立一个屏障起到既可以保护自身,又可以保护试剂的作用,例如:
· 进行限制性酶切反应。限制性酶的污染是一个大灾难,虽然大部分酶是保存在甘油中,而且甘油浓度大于50 %时通常是不会长菌的,但在稀释酶和进行没有甘油参与的操作时存在潜在污染的可能性,而且微量的常见元素的污染也会抑制酶的活性。

· 进行PCR 反应。PCR 反应中其他DNA 的掺入会导致灾难性的后果。进行PCR 反应时要使用无菌操作技术,而且不在有PCR 仪或进行PCR 反应产物分析的房间内操作可以避免偶尔的DNA 污染。

· 利用32P 磷酸盐标记细胞。这种情形下,使用无菌操作技术是出于对自身的保护,而不是出于保护细胞。出于无菌考虑,不应让盖子一直敞开、不能让气雾产生以及不要使用已经用过的移液管。

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