2022年 8月 17日, 星期三
新闻

荧光原位杂交会用到哪些试剂?

一、实验材料、试剂、仪器耗材:

人的MyoD1(MYF3)基因探、人外周血中期染色体细胞标本
指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20等
恒温水浴锅、培养箱、染色缸、载玻片、Nikon E-400荧光显微镜、盖玻片、封口膜、200μL移液器、暗盒等

二、相关溶液的配制

(1)20×SSC:175.3 g NaCl,88.2 g柠檬酸钠,加水至1 000 mL(用10 mol/L NaOH调pH 至7.0)。

(2)去离子甲酰胺(DF):将10 g混合床离子交换树脂加入100 mL甲酰胺中。电磁搅拌30 min,用Whatman l号滤纸滤。

(3)体积分数70%甲酰胺/2×SSC:35 mL甲酰胺,5 mL 20×SSC,10 mL水。

(4)体积分数50%甲酰胺/2×SSC:100 mL甲酰胺,20 mL 20×SSC,80 mL水。

(5)体积分数50%硫酸葡聚糖(DS):65℃水浴中融化,4℃或-20℃保存。

(6)杂交液:8 μL体积分数25%DS,20 μL 20×SSC混合。(或40 μL体积分数50% DS,20 μL 20×SSC,40 μL ddH2O混合)取上述混合液50 μL,与5 μL DF混合即成。其终浓度为体积分数10% DS,2×SSC,体积分数50% DF。

(7)PI/antifade溶液

PI原液:先以双蒸水配置溶液,浓度为100 μg/mL,取出1 mL,加39 mL双蒸水,使终浓度为2.5 μg/mL。

Antifade原液:以PBS缓冲液配制该溶液,使其浓度为10 mg/mL,用0.5 mmol/L的NaHCO3调pH值为8.0。取上述溶液1 mL,加9 mL甘油,混匀。

PI/antifade溶液:PI与antifade原液按体积比1:9比例充分混匀,-20℃保存备用。

(8)DAPI/antifade溶液:用去离子水配制1mL/mg DAPI储存液,按体积比1:300,以antifade溶液稀释成工作液。

(9)封闭液I:体积分数5% BSA 3 mL,20×SSC 1 mL,ddH2O 1mL,Tween20 5 μL混合。

(10)封闭液II:体积分数5% BSA 3mL,20×SSC 1mL,goat serum 250 μL,ddH2O 750 μL,Tween20 5 μL混合。

(11)荧光检测试剂稀释液:体积分数5% BSA 1mL,20×SSC 1mL,ddH2O 3mL,Tween20 5μL混合。

(12)洗脱液:100 mL 20×SSC,加水至500 mL,加Tween20 500 μL。

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