2022年 1月 28日, 星期五
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电转效率受哪些因素影响?

电穿孔效率受以下几种因素的影响:

  1. 外加电场的强度。电压过低,培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过; 电压过高,细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系, 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔, 20% ~ 50%的细胞能够存活(根据台盼蓝拒染法的检测结果) ( Patterson 1979; Baum et al. 1994) 。

  2. 电脉冲时间的长短。通常对细胞进行单次电脉冲。电脉冲的持续时间、电场形状和强度由电源容量及电穿孔杯尺寸决定。多数电穿孔装置允许研究者控制脉冲参数。电穿孔仪有指数衰减波和方形波两种电脉冲形状可供选择。

  3. 温度。有些研究者报道, 电穿孔过程中将细胞维持在室温时瞬时表达水平最高(Chu et al. 1987);而有的将细胞保持在0 °C 获得了更好的结果(Reiss et al. 1986) 。造成以上差异的原因可能是细胞类型不同或电穿孔过程中产热量不同, 较高电压(大于1000V/cm)、较长时间电脉冲(大于l00ms) 的情况容易产生较多的热量。电脉冲处理后再将细胞于电穿孔室内孵育l ~2min 可提高瞬时表达效率(Rabussay et al. 1987) 。

  4. DNA 的构象与浓度。虽然线性和环状DNA 均能够通过电穿孔进行转染,但采用线性DNA 进行瞬时表达和稳定转化的水平均更高些(Neumann et al. 1982; Potter et al. 1984;Toneguzzo et al. 1986) 。采用1 ~40μg/mL 浓度的DNA 可获得高效的转染。质粒纯度也是影响电穿孔效率的重要因素。

  5. 培养基的离子成分。用缓冲盐溶液(如HEPES 盐缓冲液)悬浮细胞,转染效率比用含甘露糖或蔗糖等非离子物质的缓冲液高数倍(Rabussay et al. 1987) 。

  6. 细胞的生理状态。生长活跃、状态健康、无污染、最好低代次的细胞可获得最佳转染效果。

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