2022年 1月 24日, 星期一
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异丙醇法沉淀DNA

DNA 在含有异丙醇的溶液中比在含有乙醇的溶液中难溶。乙醇沉淀法需要2 ~ 3 倍体积的乙醇,异丙醇沉淀则需要0.6 ~ 0.7 倍的体积。沉淀大体积溶液中的DNA 时,异丙醇是比较好的选择。在室温用异丙醇沉淀减少了一些蔗糖或者氯化钠和DNA 发生共沉淀的现象。但异丙醇还是有一些不足之处:

  • 盐在35 %的异丙醇溶液中比在65 %的乙醇溶液中难溶。
  • DNA 沉淀是半透明的,肉眼难以观测,异丙醇较乙醇不宜挥发,因此很难除去。
  • 最后,异丙醇沉淀的DNA 与微量离心管管壁结合较松,在吸取异丙醇或用乙醇洗沉淀的时候容易丢失( 见步骤5)

通常情况, DNA 乙醇沉淀法为首选,除非有必要使用较小的上清液体积。

试剂

DNA 样品

乙醇

异丙醇

乙酸钠( 3mol/L, pH 5.2 )

TE (pH 8.0 ) <A>

设备

真空吸气器

方法

  1. 将乙酸钠(3.0mol/L, pH 5.2) 加入到DNA 溶液中使其终浓度为0.3mol/L 。
  2. 加0.6 ~ 0.7 倍体积的异丙醇于室温下充分混匀。
  3. 在离心管外做好标记使沉淀容易定位, 微量离心管的样品于4 ℃离心20~ 30min
  • 4℃ 离心防止样品过热。
  1. 小心地将上清液移入一个新标记的离心管,为避免DNA 沉淀在此过程中发生丢失,应保存好上清液直至确认DNA 沉淀已经回收。
  2. 用乙醇清洗DNA 沉淀除去残留的异丙醇。
  • 残留的异丙醇阻碍DNA 被再次溶解。
  1. 在4℃, 微量离心管中的样品离心20~ 30min
  2. 小心地除去上清,使DNA 沉淀干燥。
  • 不能让DNA干燥得太彻底,否则,沉淀将会非常难溶解。当步骤8加入缓冲液时,沉淀应仍保待湿润。
  1. 用适量的TE (pH 8.0 ) 重新溶解DNA 沉淀。

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