2022年 1月 28日, 星期五
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实验室小白篇:细胞培养的基本操作

(一)无菌操作

细胞在体外生长,其生存环境发生了很大变化。首先,体外培养细胞缺乏抗感染能力,故应无菌操作,以最大限度地防止微生物污染。培养所用的一切物品、液体均应无菌。操作前最好先列出所需用品,培养液等须37°C预热或室温平衡,所有物品准备好后再开始操作, 避免往返拿取用品。

(二)细胞培养操作区域消毒

无菌间或超净台的操作区域使用前后需经紫外灯照射20-30min 进行消毒。用紫外灯照射期间,在台面上勿放置培养细胞和培养用液等。所有进入操作区域的物品需经75%乙醇擦拭消毒。工作前后台面均需经75%乙醇擦拭消霉, 特别是有液体溢出时,需立即擦拭。

(三)洗手和着装

原则上与外科手术相同。进入无菌间要更换专用无菌衣,戴口罩和帽子。双手最好戴乳胶手套, 然后用75%乙醇喷洒消毒或用乙醇棉球擦拭消毒。

(四)火焰消毒

在开放式工作台上进行培养或其他无菌操作时,首先要点燃酒精灯。之后的一切操作, 如安装吸管帽、打开或封闭瓶口等, 都需要在火焰近处,经烧灼消毒管口或瓶口后进行。金属器械不能在火焰中烧灼时间过长,吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼, 防止残留在吸管中的培养液烧焦,以致接下来使用该吸管时将有害物质带入培养液。在无菌操作台或超净工作台中操作时,火焰消毒是不必要的, 甚至是有害的。

(五)实验操作

进行细胞培养操作时,动作要稳、准,动作幅度尽可能小。工作台面上,实用物品要摆放合理, 右手用的东西放在右侧,左手用的东西放在左侧。酒精灯放在中央。打开的试剂瓶,尽可能斜放。而打开培养瓶则应平放。工作要有顺序,尽量缩短各种液体、细胞暴露的时间。吸取不同液体、处理不同的细胞要用不同的吸管,避免液体间、细胞间的交叉污染。

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