2022年 1月 28日, 星期五
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转染方法的选择取决于哪些因素?

转染方法:
将基因导入真核细胞的方法可分为三类:生化方法转染、物理方法转染、病毒介导的转导。

转染方法的选择取决于下列几个实验要素:

.最终目的是基因表达还是蛋白质生产

.采用的细胞类型(贴壁细胞或悬浮细胞,适应培养的细胞或原代细胞)

.细胞系抵抗转染压力的能力

.采用的筛选方法的类型

.培养条件

.转染的核酸种类( DNA 、RNA 、siRNA 或寡核菩酸)

.系统所要求的效率

.通量要求,低、中或高

瞬时转染与稳定转染

将DNA 导入真核细胞有两种不同的方法:瞬时转染与稳定转染。在瞬时转染中,重组DNA 导入易感的细胞系,目的基因产生短暂但高水平的表达,转染的DNA 不一定整合进入宿主染色体。当需要在短时间内分析大量的样品时,瞬时转染是优先选择的方式。通常情况下,在转染后1 ~4 天收获细胞,得到的细胞裂解物用于检测目的基因表达。

稳定或永久的转染用于建立克隆细胞系,此时转染的目的基因整合进入染色体DNA并指导目的蛋白的合成,表达量通常为中等。一般而言(取决于细胞类型),形成稳定转染细胞的效率比瞬时转染要低1 ~ 2 个数量级。采用可选择的遗传标记有利于从大量未转染的细胞中分离出少数的稳定转染体。该标记基因可存在于携带目的基因的重组质粒上,也可以在另一个单独的载体上,通过共转染与重组质粒一起导入到所需细胞系中。

 

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