2022年 1月 28日, 星期五
新闻

实验室小白篇:细胞培养用品及其准备

一、细胞培养瓶、培养皿和培养板

目前,细胞培养已很少使用传统的玻璃制品,如玻璃卡氏培养瓶、玻璃离心管、玻璃试剂瓶,而多数使用一次性的塑料制培养瓶、塑料制离心管及塑料制移液管等,而且这些物品的规格也较丰富,如培养瓶T25、T75 、T150、T175 (阿拉伯数字表示培养面积),现在还出现了培养袋、普通培养板(有不同孔径的,如 6 孔、12 孔、24 孔、48 孔、96 孔等)、培养皿(有不同直径的,如60mm、100mm、150mm) 及大面积多层培养板 。多孔板的使用便于开展高通量筛选,节省了细胞用量。大面积培养可用于以细胞为基质进行生物工程产品的研发、制备和生产等。在生物工程产品研发、制备、生产等应用的驱使下,现在还出现了分别针对悬浮细胞或贴壁细胞培养用的转瓶、中空纤维细胞培养装置、细胞发酵罐(5L 、10L、30L 、50L 等),都可用于大规模的细胞培养。

二、移液管和吸管

对于移液管和吸管,玻璃制或塑料制的均可选用,但需要准备不同规格以便操作时按需选用(如1ml 、5ml、10ml 等)。一般装在玻璃或不锈钢筒中消毒。国外有一次性塑料吸管,规格与玻璃吸管相同。此外,还有电动的移液器,操作方便、省力。为方便多孔培养板的使用及快速、准确地微量加液,还有多孔加样枪 。在实际操作中,可根据具体培养量及使用的培养器皿选择合适的移液工具。

三、离心管

在细胞传代过程中,消化后的细胞悬液需要离心,以去除胰蛋白酶, 或进行计数和调整细胞浓度等。常用的离心管包括5ml 、15ml、50ml 规格的, 塑料制或玻璃制的离心管均可, 也有厂家提供商品化的20 支一包、已消毒好的一次性塑料离心管 。玻璃离心管需严格按照玻璃器皿清洗消毒程序进行无菌处理。

四、其他用品

细胞培养还需要细胞冻存管、青霉素小瓶、不同规格的Eppendorf 管等, 用于分装血清、抗生素等; 500ml、250ml、100ml、50m) 等规格的试剂瓶,经清洗、消毒后, 用于分装培养液、血清及消化液等。另外,还需准备喷壶、吸头、棉花及滤器等 。

五、玻漓器皿的清洗及消毒

(一)玻璃器皿的清洗

细胞培养及相关工作常用的玻璃器皿包括各种规格的玻璃移液管、试剂瓶、平皿、量筒、烧杯等。虽然有自动清洗机,但该仪器费用昂贵,且需配套的洗涤剂。如果一个实验室玻璃器皿用量不是特别大,考虑经济因素等, 一般会选择人工清洗。

1. 玻璃器皿的清洁要求

  • 物理洁净:简单判断,去离子水不挂壁。
  • 化学洁净:无有机物、化学品的残留。对于洗衣粉、洗涤剂等清洗, 尤其要注意,应尽量不用或少用。
  • 生物洁净:无热原。

2. 清洗步骤

  • 清水清洗, 烤干。
  • 新的器皿用稀酸( 1mol/LHCI ) 、稀碱( 1mol/L NaOH) 处理。
  • 用过的旧器皿,特别是接触过有机物的器皿,需强酸(硫酸-重铭酸钾配制的洗液)浸泡,时间可根据污染程度确定, 一般为2h 以上或过夜。
  • 捞出后,清水冲洗25 次。
  • 去离子水冲洗10 次,或浸泡3 次,每次1~2h 。
  • 160~200 ℃ 干烤2~ 6h,或湿热高温、高压消毒。

(二)玻璃器皿的消毒

消洗干净的玻璃器皿放在容器(铝制饭盒)中或用锡箱包裹,于160℃ 干热灭菌1h , 或121℃ 高压高温灭菌20min 。

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