实验室小白篇：细胞培养用品及其准备

一、细胞培养瓶、培养皿和培养板

目前，细胞培养已很少使用传统的玻璃制品，如玻璃卡氏培养瓶、玻璃离心管、玻璃试剂瓶，而多数使用一次性的塑料制培养瓶、塑料制离心管及塑料制移液管等，而且这些物品的规格也较丰富，如培养瓶T25、T75 、T150、T175 （阿拉伯数字表示培养面积），现在还出现了培养袋、普通培养板（有不同孔径的，如 6 孔、12 孔、24 孔、48 孔、96 孔等）、培养皿（有不同直径的，如60mm、100mm、150mm) 及大面积多层培养板 。多孔板的使用便于开展高通量筛选，节省了细胞用量。大面积培养可用于以细胞为基质进行生物工程产品的研发、制备和生产等。在生物工程产品研发、制备、生产等应用的驱使下，现在还出现了分别针对悬浮细胞或贴壁细胞培养用的转瓶、中空纤维细胞培养装置、细胞发酵罐(5L 、10L、30L 、50L 等），都可用于大规模的细胞培养。

二、移液管和吸管

对于移液管和吸管，玻璃制或塑料制的均可选用，但需要准备不同规格以便操作时按需选用（如1ml 、5ml、10ml 等）。一般装在玻璃或不锈钢筒中消毒。国外有一次性塑料吸管，规格与玻璃吸管相同。此外，还有电动的移液器，操作方便、省力。为方便多孔培养板的使用及快速、准确地微量加液，还有多孔加样枪 。在实际操作中，可根据具体培养量及使用的培养器皿选择合适的移液工具。

三、离心管

在细胞传代过程中，消化后的细胞悬液需要离心，以去除胰蛋白酶， 或进行计数和调整细胞浓度等。常用的离心管包括5ml 、15ml、50ml 规格的， 塑料制或玻璃制的离心管均可， 也有厂家提供商品化的20 支一包、已消毒好的一次性塑料离心管 。玻璃离心管需严格按照玻璃器皿清洗消毒程序进行无菌处理。

四、其他用品

细胞培养还需要细胞冻存管、青霉素小瓶、不同规格的Eppendorf 管等， 用于分装血清、抗生素等； 500ml、250ml、100ml、50m) 等规格的试剂瓶，经清洗、消毒后， 用于分装培养液、血清及消化液等。另外，还需准备喷壶、吸头、棉花及滤器等 。

五、玻漓器皿的清洗及消毒

（一）玻璃器皿的清洗

细胞培养及相关工作常用的玻璃器皿包括各种规格的玻璃移液管、试剂瓶、平皿、量筒、烧杯等。虽然有自动清洗机，但该仪器费用昂贵，且需配套的洗涤剂。如果一个实验室玻璃器皿用量不是特别大，考虑经济因素等， 一般会选择人工清洗。

1. 玻璃器皿的清洁要求

• 物理洁净：简单判断，去离子水不挂壁。
• 化学洁净：无有机物、化学品的残留。对于洗衣粉、洗涤剂等清洗， 尤其要注意，应尽量不用或少用。
• 生物洁净：无热原。

2. 清洗步骤

• 清水清洗， 烤干。
• 新的器皿用稀酸( 1mol/LHCI ) 、稀碱( 1mol/L NaOH) 处理。
• 用过的旧器皿，特别是接触过有机物的器皿，需强酸（硫酸－重铭酸钾配制的洗液）浸泡，时间可根据污染程度确定， 一般为2h 以上或过夜。
• 捞出后，清水冲洗25 次。
• 去离子水冲洗10 次，或浸泡3 次，每次1~2h 。
• 160~200 ℃ 干烤2~ 6h，或湿热高温、高压消毒。

（二）玻璃器皿的消毒

消洗干净的玻璃器皿放在容器（铝制饭盒）中或用锡箱包裹，于160℃ 干热灭菌1h , 或121℃ 高压高温灭菌20min 。