2024年 7月 15日, 星期一
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丁醇抽提法浓缩核酸

用仲丁醇( 2 -丁醇)或正丁醇( 1 - 丁醇)等溶剂萃取水溶液时,部分水分子会进入有机相,而核酸依然留在水相。重复抽提几次后可显著减少核酸溶液的体积。这一浓缩方法可用于减少稀溶液的体积,以使核酸易于通过乙醇沉淀得到回收。

试剂

DNA 样品     异丁醇

方法

  1. 计算核酸溶液体积,在2 5 °C 下加入等量的异丙醇。轻微、充分混匀两相。
  • 加入过多的异丙醇可能会导致除去所有水分并使核酸发生沉淀。如果发生这种情况,向有机相中加入水直到水相(其中包含核酸分子)再次形成。
  1. 室温下,将溶液置于微量离心机中以最大转速离心20s, 或者用台式离心机在1600r/min 下离心。用微量移液器移去上清(异丙醇)
  2. 重复步骤1 和2 直到获得想要的水相。
  • 因为异丙醇抽提液不能除去盐分, 盐的浓度会伴随体积的减少而增加。核酸可以通过柱层析或者乙醇沉淀转移到适当的缓冲液中。异丙醇在水中最大的溶解度为20℃溶解5% 、30 ℃溶解7.5% 。水在异丙醇中最大的溶解度为20℃溶解5 % 、30℃溶解17.3 % 。

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