RNA沉淀方法

乙醇沉淀RNA
通常RNA 可以像DNA 一样沉淀。
步骤
I. 加入1/10 体积1 mol/L 的NaOAc(pH4. 8) 和2.5 倍体积冷的95 %的乙醇。
2. -20’C 下沉淀过夜。
3. 用70 %的乙醇洗涤沉淀。
注意:当你处理少量RNA 的时候(低千5 μg) ,在RNA 沉淀之前加入一些载体或者共沉淀物,这类物质将帮助沉淀RNA, 更容易看见沉淀,两种载体是糖原和酵母RNA 。

选择性的RNA 沉淀
如果是DNA-RNA 的混合物(例如,在体外转录之后),可以将乙酸胺作为盐用于单独沉淀RNA 。
步骤1. 加入5 mol/L 乙酸胺到RNA 中,终浓度为2.5 mol/L 。
2. 冰上放置15 min 。
3. 4°C 高速离心15 min 。
4. 移去上清,用70 %的乙醇洗涤沉淀。
5. 用适量不含RNase 的水或者缓冲液来重悬RNA 沉淀。
注意:由于乙酸胺会因失去氨基而降解(该基团将影响RNA) ,所以使用的溶液应该用纯盐来配制,而且应该放在冷的密封容器中,溶液通过过滤除菌存放在4°C 。

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