DNA的乙醇沉淀

沉淀DNA 样品能达到浓缩的目的，而且沉淀也会去除阻止许多酶反应的残留氯仿。

一、步骤

1. 于最多体积450 μl 的DNA 样品中，加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。
2. 加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇，充分混匀。
3. 样品踩于冷环境中沉淀：-20℃ 过夜，或－70℃30 min, 或干冰中5 min 。

使用干冰进行乙醇沉淀

用锤子将干冰砸成粉末，再将管子插入粉末；或将干冰砸成小块，置于抗冻容器中，加入95% 乙醇捣成稀泥，插入管子。注意：乙醇会洗去标签。

 

4. 高速离心样品15 – 30 min, 转速至少12000g, 如果没有冷冻离心机，将离心机置于4℃ 。
5. 除去上清，上清可以倒入下水道中。
6. 离心管倒置于纸巾上吸干。
7. 预冷的70％乙醇洗涤沉淀。
8. 按步骤6干燥或使用真空浓缩机。
9. 用pH8.0 的TE (10mmol/L Tris· HCI, 0.1 mmol/L EDTA) 重悬DNA 。如果沉淀不能完全溶解，加入更多的TE, 将样品保存于4℃。

三、温馨提示

在处理大分子DNA （大于30 kb) 时要特别小心，由于DNA 样品不能抹荡，只能颠倒或转动混匀。去除表面的氯仿，代替用乙醇沉淀DNA 样品的是， DNA 溶液需要对大体积的冷TNE 溶液进行透析或用水饱和的乙醚抽提。