如何判断细胞是否被污染?

发生污染,既耽误时间又是一个灾难,熟练的无菌操作能避免许多问题,但早期检测污染是一种可以预警的方法。对于培养箱中的每瓶细胞都要注意观察,要养成习惯,每次打开培养箱时,迅速看看有没有发生污染。

细菌、酵母、真菌、霉菌、支原体以及其他的培养细胞都可能引起污染。

怎样识别污染

一、肉眼观察,把培养瓶或培养皿拿起来,对着光线检查。

  • 浑浊情况。即使细胞密度很高,培养基也应该是透明的。轻轻移动或晃动培养瓶,观察培养基的浑浊或悬浮情况,一些霉菌可能会在培养基的表面形成菌落。
  • 培养基颜色的变化。酸性条件下,加了酚红的培养基会由红变黄,而碱性条件下会变成红紫色。细菌污染常常会使培养基变成黄色,真菌污染会使培养基变成深紫红色。
  • 闻!当然不能打开瓶子去闻,把鼻子贴在瓶口闻,许多污染发生以后都会散发出易察觉的、特殊的气味,甚至一打开培养箱门就闻到了。

二、显微观察。在倒置显微镜下,先用低倍(10 X) 再用高倍(40 X) 物镜(总放大倍数为400) 观察细胞培养皿或培养瓶中的细胞:

  • 其他有机体。在低倍镜下,真菌的菌丝体成长棒状,并横穿整个视野,还可以观察到酵母,有时呈小圆球形,有时还有芽。

在高倍镜下可以观察到细菌,它们可能是棒状或球状,单独成链或成团存在,它们也可能和细胞混在一起,并且明显处于细胞内部,有些细胞可能已经裂解变得模糊。观察时可能每两个视野才出现一个污染(当然也算被污染了!),而且可能污染物是可以运动的。

  • 损伤细胞。感染会杀死细胞,可能导致每个细胞都裂解和/或细胞层从附着物上完全剥离,更可能的是细胞变得不规则(或大或小),在低倍镜下是黑色的粒状

悬浮培养细胞比贴壁培养细胞更加难以显微观察,尤其是高倍显微镜下。

  • 将培养瓶或培养皿放在显缴镜的载物台上,静置一会。
  • 将焦距对准器皿的底部,观察那些轻微附着的细胞,因为它们可能已经接触到了微生物。
  • 对准整个培养瓶焦距,当发现细胞的时候,用细聚焦调节旋钮调节,仔细检查周围的培养基有没有污染发生。
图一 倒置显微镜放大倍数400 倍下观察到的贴壁细胞被污染的情况
a 霉菌; b 酵母; c 细菌,小的棒状; d 细菌,成团的球状,有些细菌已经进入细胞内部。

如果你不能确定是否发生了污染

  • 制作湿涂片或染色片。取1 ml 培养基离心,用50 μl 培养基或缓冲液重新悬浮细胞,滴一滴到载玻片,盖上盖玻片制成湿涂片;或涂片、固定并染色(甲基兰或革兰氏染液),在高倍镜下观察。
  • 将细胞在营养培养基或血琼脂培养基上划线, 37’C 培养3 天。如果有菌落,那么细胞被污染了。
  • 取1 ml 的细胞培养液至无菌的微批离心管中, 37’C 培养3 天。观察到浑浊物,做湿涂片显微镜观察。

推荐

悬浮细胞的分瓶操作步骤

悬浮细胞的分瓶 轻轻的摇匀培养 …

发表评论

您的电子邮箱地址不会被公开。 必填项已用*标注