导致western Blot发光（ECL）“背景高”的原因有哪些？

Western Blot发光经常有“背景太高”问题，导致“背景高”的原因有很多，主要有以下几个方面：

1. 抗体浓度过高，洗涤不充分，可以造成抗体在膜上的非特异结合，导致高背景。可通过降低抗体稀释度，增加洗膜次数和Buffer用量，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20加以改善。

2. 封闭不充分，会造成抗体在膜上的非特异结合，导致高背景。可通过4℃封闭过夜或增加封闭液中的蛋白浓度加以改善。

3. 使用了不恰当的封闭剂，可尝试不同的封闭剂。

4. 曝光过度，可减少底物显色时间，缩短曝光时间。

5. 操作过程中膜干了。确保膜完全浸没于buffer中，始终杜绝膜干。

6.发光液质量问题。可选用优质的发光试剂，比如英格恩生物的Enlight等。