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western-blot实验常见问题及解答

常见问题 解决对策
 

两块玻璃板之间灌胶,胶总是不平

玻璃没有洗干净,应该洗得很干净
过硫酸铵和TEMED加量相对较多
加完试剂后应摇匀
           总是漏胶 避免玻璃边缘(与胶条接触处)破损
将两块玻璃板摆放对齐,底部处于同一平面
膜上有明显气泡 操作时将气泡完全排除
靠膜一侧的滤纸应铺平
 

特异性低

优化一抗
提高一抗和二抗的稀释度
降低SDS-PAGE中蛋白的上样量
 

背景高

优化封闭液
优化洗涤缓冲液,增加洗涤次数
减少曝光时间
 

信号低

优化一抗
浓缩样品
选择更高灵敏度的发光液,如enlight等。

 

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