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Western blot 中Tween-20的作用是什么?应该怎么用?

Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体,对于TBST的配方也基本上相残不多,其中配方中就有一种组分是Tween-20,一种黄色或琥珀色澄明的油状液体,具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂,Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢?

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Tween-20

首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20,也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate,中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或琥珀色澄明的油状液体,具有特殊的臭气和微弱苦味。分子中含有较多的亲水性基团,可与水、甲醇、乙醇、异丙醇、丙二醇、乙二醇、棉子油等混溶。是常用的非离子性去垢剂。

Tween-20的应用

Tween-20是一种非离子型表面活性剂。用途为水包油乳化剂、可用作溶剂、扩散剂、稳定剂、润滑剂和抗静电剂等。气相色谱固定液(最高使用温度120℃)分离分析挥发油、脂肪酸酯、醇、酮和卤化物。

Tween-20在Western blot 中的作用?

Western blot的操作流程中大部分都用到TBST洗液,而且还是封闭,一抗二抗孵育这种比较关键的步骤。通常Tween-20作为一种非离子型表面活性剂,效果和SDS、BSA作用差不多。由于膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替,因此在封闭时可使用Tween20清除去污剂,而且浓度不要超过0.3%(0.05%效果最好),如果牛奶封闭效果不好可以提高吐温浓度。
在WB洗液里的吐温是和BSA一样,对抗原抗体蛋白提供保护作用,同时因为是表面活性剂(司盘加成亲水的环氧乙烷基团后的化合物),可以减少抗体对抗原的非特异性作用,用于洗脱未结合的抗体、减少非特异性结合。Tween-20是我们用TBST的时候Tween-20得用量是0.5ml/L,不加SDS。

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