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跟师姐学做大鼠慢性肾衰竭(CRF)模型

慢性肾功能衰竭(CRF)是一种进行性不可逆的临床综合征,近年来国内外许多学者对慢性肾衰竭的动物模型进行了研究。造模技术不断完善的现在,仍较多偏于细微局部的观察研究,统一、简便、稳定的CRF动物模型是研究慢性肾衰实验过程中急需解决的问题。

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目前常制备的CRF模型,相对较简便稳定,通过观察大鼠的生物学特征,对研究CRF的发病机制,预防终末期肾病的发生起到一定的作用。

下面说一下常用的Yokozawa法即腺嘌呤诱发大鼠慢性肾衰竭的动物模型和Platt法,即肾5/6切除加对侧肾摘除法制作的CRF模型。

一、Yokozawa法即腺嘌呤诱发大鼠CRF模型:
腺嘌呤l g溶于40 mL生理盐水中制成混悬液,浓度为2.5%,按200 ms/(kg.d)剂量,每天定时给大鼠灌胃给药。自由摄取普通饲料、饮水。实验周期30 d,第29天晚禁食12 h,第30天晨采血5 mL,取2 mL血做红细胞计数(RBC)、血红蛋白定量(HGB)、红细胞体积(HCT)的测定。剩余血离心,分离血清测定Ca“、P”、BUN、Scr含量。

二、Platt法5/6肾切除大鼠CRF模型:
先以苯巴比妥(100 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,然后以乙醚诱导麻醉,使大鼠仰卧,下肢交叉固定于手术台上以暴露背部左肾区,从距左脊肋骨1.5 cm处做斜向外方切口,经后腹膜取肾,暴露。肾脏,分离肾周脂肪后,弧形切除2/3肾组织(主要切除皮质部分)用明胶海棉压迫止血片刻,再滴加数滴纤维蛋白原和凝血酶溶液,稍等片刻,当切面上不再有活动性出血后复位剩余左肾,缝合。一周后切除整个右肾,两次手术共切除肾脏约80%左右。实验期间每隔15 d在大鼠尾静脉抽血,至30 d时腹腔静脉抽血,常规方法测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血钙(Ca)、血磷(P)、血甲状旁腺激素(PTH)。

说明:
1、小鼠的5/6 肾切要比大鼠要麻烦点,先节扎一侧肾动脉的下支(建议在显微镜下操作),可以观察到下1/3 的肾缺血(有个体差异),然后用电刀切除上1/3,最后切除对侧肾脏。
2、约1/10的小鼠肾动脉分支过于靠近肾门或在静脉后侧,难于分离,建议放弃;3、根据缺血部位大小切除肾脏,一定是5/6肾切,过多死亡率高(正常为20%-30%),过低没有肾功能衰竭;
4、建议用129小鼠或C57。

说起来简单,实际操作的时候还是需要一定技术的,尤其是5/6肾切除实验。两种方法各有优势,可分别适用于不同领域的研究。Yokozawa法即腺嘌呤诱发大鼠CRF模型方法简便,肾衰现象明显,成功率相对偏高。不过实验中也发现导致采食不一而使模型产生较大差异,动物死亡率较高。大鼠肾大部分切除诱发肾衰(Platt法)模型可能更倾向于临床多发高发的肾衰疾病的结果。符合人类多种慢性肾脏疾病导致功能衰竭的中后期功能和病理形态改变。

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