做Western Blot发光实验经常有“淬灭”的情况发生,经常有朋友反映,加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光,可亮光很快就消逝了,压完片后,条带却很弱,甚至什么也没有。这种情况发生的原因是什么? 要解释这种情况发生的原因,必须先了解ECL化学发光的原理。一般的发光试剂含鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化,产生荧光 …
阅读更多 »Western-Blot中BSA,脱脂蛋白的作用是什么?
经常有人做Western-Blot会疑惑:为什么做蛋白实验,应该把杂蛋白去除才对,会担心其他蛋白的加入会影响实验结果,增加背景。但为什么偏偏会用加入BSA,脱脂蛋白的方法减少背景呢? 这需要从Western-Blot的原理说起,Western-Blot中电泳转膜后让蛋白分布NC膜或PVDF膜上,但膜上还有很多地方是空白的,这些空白的地方如果不被封闭,很可能就 …
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