共转染实验中,判断质粒的表达能力通常有几种常见的方式,具体方法取决于你的实验设计和质粒中所包含的标记。以下是几种常用的检测方式: 1. 荧光标记 如果质粒中包含了荧光标记基因(如GFP、RFP等),通过显微镜直接观察荧光信号是最直观的方式。这种方法不仅可以评估质粒的转染效率,还可以间接反映出质粒的表达能力。 优势:快速、简便,能够同时评估转染效率和蛋白表达。 …
阅读更多 »如何做好DNA细胞转染实验?
我认为,要想做好质粒DNA细胞转染实验,应注意以下几点: 1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功 …
阅读更多 »细胞DNA转染注意事项
1)优化条件:质粒不同,所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。这种情况下需要对质粒转染试剂的配比进行优化。另外,可选用更合适的转染试剂,如Entranster试剂。 2)抑制剂:不要在用于制备DNA-转染试剂复合物的培养基中使用抗生素,EDTA,柠檬酸盐,磷酸盐,RPMI,硫酸软骨素,透明质酸,硫酸葡聚糖或其他硫酸 …
阅读更多 »DNA转染与ZNF121和乳腺上皮细胞的靶基因调控研究
新型锌指蛋白121(ZNF121)已被证明在物理和功能上与MYC癌蛋白相关联,以调节细胞增殖和可能的乳腺癌发展。为了进一步了解ZnF121在细胞增殖和癌变过程中的作用,现分享一篇DNA转染(Entranster)与ZNF121和乳腺上皮细胞的靶基因调控研究的文献,以供参考。
阅读更多 »DNA转染与干细胞自我更新和多能性维持的研究
干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的原始细胞,包括胚胎干细胞、成体干细胞和诱导多能干细胞(IPS)。干细胞具有非常重要的理论研究意义和临床应用价值。利用胚胎干细胞建立多种细胞类型的体外分化系统,使人们能够在细胞和分子水平上研究哺乳动物的发育过程;不同发育阶段的细胞可确定胚胎发 …
阅读更多 »DNA转染(Entranster)与微管蛋白多翻译后修饰的蛋白质组学分析和功能表征研究
微管蛋白已知会有独特的翻译后修饰(PTMS),如脱酪氨酸和聚谷氨酰化,特别是在非结构化羧基末端尾(CTTS)中。然而,更多传统的微管蛋白的PTMS及其在微管性质和功能的调节中的作用仍然不明确。现分享一篇DNA转染(Entranster)与微管蛋白多翻译后修饰的蛋白质组学分析和功能表征研究的文献,以供参考。
阅读更多 »细胞DNA转染效率低的原因
DNA转染效率低的原因可从以下几方面找: 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策:用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策:对大多数细胞而言,质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3,一般要做优化实验,比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策:用好的质粒纯化试剂确保质 …
阅读更多 »质粒DNA转染实验效率影响因素
1, 质粒的构建:启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。 2, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的 …
阅读更多 »DNA转染与基于de novo设计蛋白DS119的TNFa结合蛋白合理设计研究
蛋白质-蛋白质相互作用的合理设计是创造新型蛋白质药物、诊断探针或调节细胞信号通路的有力工具。SH3和PDZ结构域等小型模块化支架在调节蛋白质相互作用中起着重要作用,因此这些结构域在蛋白质设计中的应用已被广泛研究。De novo蛋白质设计为工程定制蛋白质功能提供模板,为合成生物学研究提供正交蛋白质相互作用网络。已经开发出各种计算方法来引入已知蛋白 …
阅读更多 »DNA转染与RAB31沉默对骨肉瘤细胞增殖和迁徙影响研究
骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)是人类原发性恶性骨肿瘤中最常见的一种类型,具有远距离侵袭和局部侵袭的潜在倾向。OS主要见于青少年儿童,首次发病多为15-19岁。骨肉瘤是一种侵袭性恶性肿瘤,起源于间充质(因而是肉瘤)的原始转化细胞,表现为成骨细胞分化和产生恶性骨样。现分享一篇DNA转染(entranster)与RAB31沉默对骨肉瘤细胞 …
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