由此可见,在转染各类细胞系时,Entranster-E具有明显的优势,是一款比较理想的电转染试剂。
阅读更多 »树鼩CRISPR筛选发现RNF6促进寨卡病毒跨越血脑屏障
标题: Tree Shrew Genome-Wide CRISPR Screen Identifies RNF6 as a Proviral Host Factor for Zika Virus Replication in Brain Microvascular Endothelial Cells (树鼩全基因组CRISPR筛选鉴定出RNF6是寨卡病毒在脑 …
阅读更多 »电转染实验的建议
关于细胞的电转染实验,现提出以下几点建议供大家参考: 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于 …
阅读更多 »如果细胞密度低,铺板48h可以转染吗?
如果细胞密度较低,一般来说,细胞在转染前的培养时间是很关键的。48小时的培养时间通常是足够的,但是否适合转染还要考虑几个因素: 1. 细胞的生长状态 细胞在转染时最好处于对数生长期,也就是细胞在活跃分裂和增殖中。若细胞密度过低,可能会处于生长迟缓或衰退状态,这会影响转染效率。 细胞密度太低(<30%):如果细胞太少,可能会影响转染试剂的吸附和细胞的转染 …
阅读更多 »转染方法的选择取决于哪些因素?
转染方法:将基因导入真核细胞的方法可分为三类:生化方法转染、物理方法转染、病毒介导的转导。 转染方法的选择取决于下列几个实验要素: .最终目的是基因表达还是蛋白质生产 .采用的细胞类型(贴壁细胞或悬浮细胞,适应培养的细胞或原代细胞) .细胞系抵抗转染压力的能力 .采用的筛选方法的类型 .培养条件 .转染的核酸种类( DNA 、RNA 、siRNA 或寡核菩酸 …
阅读更多 »为什么脂质体细胞转染试剂毒性大?
已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 19 …
阅读更多 »G6PD SUMO化通过代谢重编程促进肝癌氧化应激适应和耐药
文章标题 《SUMO化稳定的G6PD通过PKCδ磷酸化触发机制,调控代谢重编程,以促进肝细胞癌在氧化应激下的存活和化疗耐药性》 英文标题:SUMOylation-stabilized G6PD orchestrates metabolic rewiring for oxidative stress survival and chemoresistance i …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想怎么办?
siRNA转染效率不理想,常见的原因有: 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率 …
阅读更多 »如何做好DNA转染实验?
我认为,要想做好质粒DNA细胞转染实验,应注意以下几点: 1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几 …
阅读更多 »慢病毒感染后,细胞不生长怎么办
慢病毒感染后,细胞不生长可能有多种原因。以下是一些常见的原因和解决方法: 病毒滴度过高: 原因:高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性,使细胞无法正常生长。 解决方法:降低病毒的滴度,进行一系列稀释实验,找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 细胞状态不佳: 原因:感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法:确保细胞在最佳状态下进行感染,例如在感染前 …
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