细胞培养

随着各型肝炎、肝硬化、肝癌等慢性肝病的发病率日益升高，体外培养的肝细胞也被广泛地用千肝病基础研究中。尽管细胞培养技术不断改进和成熟，国内外也先后建立了多株人肝癌细胞系，但体外分离和培养人正常肝细胞仍是非常有价值的研究材料。 （一）材料与设备 1. 设备与器材   超净工作台、离心机、CO2 培养箱、－70℃ 冰箱、－20℃冰箱。2. 无菌材料   大培养皿、 …

1.从细胞单层吸出培养基。2. 缓慢加入37’C 温浴的PBS 或不含血清的培养基，让培养基沿容器壁流下，注意不要滴在细胞上，以免冲掉附着不牢的细胞。3. 再吸出PBS 或培养基。4. 加入含0.25 ％胰蛋白酶的PBS, 加入蜇以刚刚没过细胞为宜。5. 立即吸去胰蛋白酶，停留在细胞上的时间为10 ~ 30s(可以用不含血清的旧培养基多洗细胞几次 …

从新生大鼠的骨骼肌中分离成肌细胞（卫星细胞），在体外培养条件下，成肌细胞在培养底物上增殖，在诱导分化条件下，可迁移成直线排列，最终融合形成多细胞肌管。已有报道，将自体的骨骼肌细胞移植入心肌梗死后的瘢痕可改善心肌功能。这些进展激发了科研人员对体外成肌细胞增殖、分化分子机制的基础研究。下面将介绍新生大鼠骨骼肌细胞的原代培养及肌管诱导分化。该方法也可用于小鼠、兔、 …

给养  （给予新鲜的培养基） ，细胞生长过程中会消耗培养基中的某些必需因子，必须更换培养基。 分瓶  （传代、细胞数批减少），细胞数量不断增长，超出容器和培养基的负荷。（PS: 培养和传代是同时进行的，很难只进行一个而不进行另一个操作。） 冻存    细胞株都必须分装冻存样品。可以作为备用，防止细胞表型的漂变 …

（一）无菌操作 细胞在体外生长，其生存环境发生了很大变化。首先，体外培养细胞缺乏抗感染能力，故应无菌操作，以最大限度地防止微生物污染。培养所用的一切物品、液体均应无菌。操作前最好先列出所需用品，培养液等须37°C预热或室温平衡，所有物品准备好后再开始操作， 避免往返拿取用品。 （二）细胞培养操作区域消毒 无菌间或超净台的操作区域使用前后需经紫外灯照射20-3 …

大多数实验室购买的培养基是预先处理好的瓶装液体培养基，或者是干粉状的需要水化和过滤除菌的培养基，后者比较便宜，用量大时更有价值。 由于培养基中都有酚红或其他染料pH 指示剂，虽然外观看上去都差不多，但事实上它们并不一样，所以千万不能用错。 添加有酚红pH指示剂的培养基的颜色 pH6.5 以下为拧檬黄 pH6.5 为黄色 pH7.0 为橙色 pH7.4 为红色 …