Q1: 一个孔中应接种多少个细胞? A1: 当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。 Q2: 能否用3 …
阅读更多 »病毒包装过程中,细胞大量死亡,还有必要收集病毒吗
在病毒包装过程中,如果观察到细胞大量死亡,是否还要收集病毒需要根据具体情况判断。以下是一些可能的考虑因素: 病毒滴度:尽管细胞大量死亡,仍然有可能产生高滴度的病毒。如果病毒滴度足够高,可以继续收集病毒用于后续实验。 污染:细胞大量死亡可能是由于污染引起的。如果怀疑有细菌、真菌或支原体污染,收集病毒可能不是一个好主意,因为污染会影响后续实验的准确性。 病毒本身 …
阅读更多 »细胞周期测定实验有哪些,怎么做?
细胞计数法 实验方法原理:体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。 分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比,它是测定细胞周期的一个重要指标,也是不同实验研究选择细胞的重要依据。 实验步骤: 一、消化细胞,将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。 二、CO2培养箱中培养4 …
阅读更多 »细胞周期与细胞凋亡分析
CCAA试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是基于PI 染色(Propidium staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的试剂盒。 下面以engreen的CCAA试剂盒为例,说明一下检测方法。 1.收集并调整细胞浓度为1×106/ml,取1ml单细胞 …
阅读更多 »JAM分析
此分析方法基于用[3H] -胸腺嘧啶脱氧核苷标记核DNA, 用玻璃纤维滤器获得样品。 凋亡产生的DNA 片段小到可以通过玻璃纤维滤器,因此特定样品的放射活性减少。很显然,这种分析对循环的细胞是必需的。 实验前一天,将细胞接种于新鲜培养基。对数生长期细胞可更好地掺入[3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷。 收获细胞,在新鲜培养基中以1×106细胞/ml重悬,用5 …
阅读更多 »细胞凋亡检测
方法 细胞类型 特点 说明 形态学/细胞旋转 不限 简单,快速,低廉,贮存无限制 略带主观性,但可靠 Hoechst染色 不限 极快,不能贮存 略带主观性,但可靠 吖啶橙/溴化乙锭 不限 极快,不能贮存 凋亡初期可用,略带主观性,但可靠 电子显微术 不限 耗时,昂贵 可靠 FACS/FSC SSC 非贴壁细胞 简单,须即时进行 客观,仅能提示凋亡 FAC …
阅读更多 »TUNEL分析
TUNEL方法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP-地高辛配基切口标记)源自完整固定的细胞核DNA 裂解部位标记(如Gavrieli et al. 1992)。 该法可用于组织切片、玻片上细胞生长、流式细胞计量术分析,用于组织切片的改进程序由Naik 及其合作者提出(Naik et al. 1996) ,叙述如下 1、组织切片的TUNEL 染色1)取下组织, …
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