原则上可以,具体要看以下几个条件: 步骤可行性: 分别包装:在293T细胞中分别转染两种构建(比如psPAX2 + pMD2.G + 各自的载体),收集病毒上清; 浓缩:超速离心或PEG浓缩,两种病毒分别处理; 混合感染:感染前混合两种浓缩后的病毒,用于感染小鼠CD8+ T细胞。 技术要点: T细胞激活:CD8+ T细胞对逆转录病毒天然不易感染,通常需要先用 …
阅读更多 »测定病毒滴度时,是使用 HEK293 细胞,还是用目的细胞?
测定病毒滴度时,是否可以直接使用 HEK293 细胞,取决于你使用的病毒类型和实验目的。一般来说: 如果是腺病毒或慢病毒,HEK293 细胞(特别是 HEK293T 细胞)通常是不错的选择,因为它们表达病毒包装过程中需要的辅助因子(如腺病毒的 E1A/E1B 或慢病毒的 VSV-G),可以有效地被感染并产生明显的病毒效应。因此,很多实验室会用 293 细胞测 …
阅读更多 »在比较慢病毒和正常病毒(阳性对照)时,如何合理调整 MOI 值,使其具有可比性?
慢病毒滴度较低,通常需要较高的 MOI(如 20)才能有效感染,而正常病毒滴度较高,合适的 MOI 可能为 0.1。要将两者放在一起进行比较,可能需要考虑以下因素: 实验目的: 如果关注的是相同数量的感染细胞,可以根据感染效率调整 MOI,以保证相似的感染率。 如果关注的是病毒自身的感染特性,可能需要分别选择最佳 MOI 进行单独实验,再综合分析。 病毒载量 …
阅读更多 »逆转录病毒可以共感染吗?
可以。逆转录病毒(如MLV、lentivirus等)可以共感染同一细胞,尤其是不同病毒包装不同的转基因载体时,可以实现共转导(co-transduction),从而使同一细胞获得多个基因。 但要注意: 病毒滴度足够高:每个病毒的MOI(Multiplicity of Infection)需要合适,才有可能让同一细胞被两种病毒都感染。 标记或选择机制清晰:常用 …
阅读更多 »如何解决病毒感染细胞效率低的难题?
病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 使用Envirus-LV,可以提高效率约20-50倍。 病毒感染细胞本来效率就较低,整个过程相对复杂难操作,一般一次花费周期至少两三个月,多则几个月到十几个月不等,经费也是几万到十几万。万一实验失败需要重复操作会花费更多的时间和开支。所以有效提高病毒转染 …
阅读更多 »做慢病毒滴度测定实验,请问是所有的都用293t细胞来做,还是说我要在别的细胞上做稳转株,我用别的细胞去摸病毒滴度就可以呀?
核心原则 标准物理滴度测定:强烈推荐使用293T细胞。 功能性滴度测定/特定应用验证:使用你的目标细胞。 详细解释 为什么推荐293T细胞测定物理滴度? 高易感性: 293T细胞对慢病毒感染非常敏感,因为它们高表达慢病毒进入所需的受体(如LDL受体)。 高转导效率: 它们通常能达到非常高的转导效率(>80%甚至90%+),这使得检测阳性细胞、计算滴度变 …
阅读更多 »在慢病毒滴度测定的倍比稀释实验中,为什么计算滴度时好像没用上复孔?
通常,在计算滴度时,我们会选取某个稀释度的特定数据(如阳性细胞数),但这个数据往往是复孔的平均值,或者用于确认某个稀释度的数据是否可靠。因此,虽然计算公式中可能未直接体现复孔的作用,但复孔实际上已经在前期数据处理中起到了关键作用。 总结:复孔的作用是提高数据的稳定性和准确性,即使计算滴度时没有直接体现,实际上已经通过平均值计算、异常值排除等方式间接影响了最终 …
阅读更多 »AAV病毒-细胞外RNAs-TLR3信号通路认知障碍研究 (IF:39.3)
文献标题:Extracellular RNAs-TLR3 signaling contributes to cognitive impairment after chronic neuropathic pain in mice 影响因子:Signal Transduction and Targeted Therapy 是Nature旗下期刊,2023年影响因 …
阅读更多 »PD-1沉默对CAR-T细胞影响研究
文献标题 PD-1 silencing impairs the anti-tumor function of chimeric antigen receptor modified T cells by inhibiting proliferation activity 影响因子 8.676(Journal for ImmunoTherapy of Cance …
阅读更多 »怎么根据病毒的TCID50计算给毒的MOI值
根据病毒的TCID50值计算给毒的MOI(Multiplicity of Infection,感染倍数)通常需要几个步骤。MOI 是指每个宿主细胞上平均感染的病毒颗粒数。 步骤概述: 知道病毒的TCID50值:TCID50 是一种病毒活性的度量,表示每单位体积(通常为每毫升)病毒悬液中,能在 50% 的细胞文化中引起感染的病毒数量。单位通常是病毒颗粒数/毫升 …
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