英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
DNA 在含有异丙醇的溶液中比在含有乙醇的溶液中难溶。乙醇沉淀法需要2 ~ 3 倍体积的乙醇，异丙醇沉淀则需要0.6 ~ 0.7 倍的体积。沉淀大体积溶液中的DNA 时，异丙醇是比较好的选择。在室温用异丙醇沉淀减少了一些蔗糖或者氯化钠和DNA 发生共沉淀的现象。但异丙醇还是有一些不足之处：
- 盐在35 ％的异丙醇溶液中比在65 ％的乙醇溶液中难溶。
- DNA 沉淀是半透明的，肉眼难以观测，异丙醇较乙醇不宜挥发，因此很难除去。
- 最后，异丙醇沉淀的DNA 与微量离心管管壁结合较松，在吸取异丙醇或用乙醇洗沉淀的时候容易丢失（ 见步骤5)
通常情况， DNA 乙醇沉淀法为首选，除非有必要使用较小的上清液体积。
试剂
DNA 样品
乙醇
异丙醇
乙酸钠( 3mol/L, pH 5.2 )
TE (pH 8.0 ) <A>
设备
真空吸气器
方法
- 将乙酸钠(3.0mol/L, pH 5.2) 加入到DNA 溶液中使其终浓度为0.3mol/L 。
- 加0.6 ~ 0.7 倍体积的异丙醇于室温下充分混匀。
- 在离心管外做好标记使沉淀容易定位， 微量离心管的样品于4 ℃离心20~ 30min
- 4℃ 离心防止样品过热。
- 小心地将上清液移入一个新标记的离心管，为避免DNA 沉淀在此过程中发生丢失，应保存好上清液直至确认DNA 沉淀已经回收。
- 用乙醇清洗DNA 沉淀除去残留的异丙醇。
- 残留的异丙醇阻碍DNA 被再次溶解。
- 在4℃， 微量离心管中的样品离心20~ 30min
- 小心地除去上清，使DNA 沉淀干燥。
- 不能让DNA干燥得太彻底，否则，沉淀将会非常难溶解。当步骤8加入缓冲液时，沉淀应仍保待湿润。
- 用适量的TE (pH 8.0 ) 重新溶解DNA 沉淀。