2022年 8月 17日, 星期三
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细胞在基质凝胶中的培养

基质凝胶培养是研究细胞与细胞、细胞与基质之间相互作用的重要方法,如细胞运动性、肿瘤细胞的侵袭转移能力的研究。现在应用最广泛的凝胶为I 型鼠尾胶原,其他还有纤维蛋白胶原、血浆胶原等。

(一)材料与设备

胶原凝胶I (collagen I) 、完全培养液、培养皿(直径35mm)、吸管、移液枪、CO2 培养箱。

(二)操作步骤

1.用完全培养液调节胶原凝胶的浓度为2.0mg/ml, 充分混匀。
2. 在培养皿中加入1ml 上述凝胶培养液,保证培养皿底部覆盖均匀。
3. 放置CO2 培养箱中15min, 使凝胶凝固。
4. 水化凝胶,加入2ml 完全培养液, CO2培养箱中孵育10 min 。
5 . 小心吸出培养液,避免弄破凝胶。
6. 加2ml 细胞悬液(0.5 X 106~1X 106 个/ml) 于凝胶上, CO2 培养箱中继续培养。

(三)注意事项

1.凝胶的浓度应根据细胞本身的特性决定,一般为1.5~3mg/ml 。
2. 保证凝胶完全覆盖培养瓶(皿)的底部,厚度为1 ~2mm。
3. 凝胶水化后易破裂,应小心吸出水化液。
4. 细胞可铺在已固化好的凝胶上,也可与液态的胶原凝胶培养液混匀后接种到培养皿中。

(四)小结

肿瘤细胞血管拟态的体外研究, 须借助三维培养。内皮细胞在圾胶三维培养中会形成血管网。

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