七鳃鳗免疫新机制：miR-4561 靶向 LIP 调控细菌清除

1. 研究背景与问题

七鳃鳗作为无脊椎动物与脊椎动物之间的关键进化节点，其免疫调控机制备受关注。七鳃鳗免疫蛋白（LIP）是重要的免疫调节因子，但微小RNA（miRNA）在七鳃鳗免疫中的作用尚不清楚。本研究通过构建七鳃鳗 miRNA 表达谱，探究 miR-4561 对 LIP 的调控及其在细菌清除中的功能。

2. 模型与分组

研究以七鳃鳗（*Lampetra morii*）为模型，针对 supraneural body 组织进行体内转染实验。实验分为三组：miR-4561 模拟物（mimics）组、miR-4561 抑制剂（inhibitor）组以及阴性对照（NC）组。另在斑马鱼胚胎中进行了共注射实验，以验证 miR-4561 与 LIP 3′-UTR 的靶向关系。

3. 本公司产品在这个实验里具体怎么用的

在体内过表达实验中，使用 Engreen 的 Entranster 试剂（含 10% 葡萄糖）将 miR-4561 mimics、inhibitor 和 NC 转染至 supraneural body 组织。寡核苷酸用 DEPC 水稀释至终浓度 50 μM，然后与转染试剂混合。转染效率通过 qRT-PCR 检测 miR-4561 和 lip 的表达来评估。在斑马鱼胚胎实验中，于 1-2 细胞期注射 50 μM 的寡核苷酸 4-5 nL/胚胎；共注射时，每胚胎注射 1.2 ng mimics 和 400 pg 的 pEGFP-lip-3’UTR-WT/MUT 质粒。

4. 结果要点

研究发现 miR-4561 的表达与 LIP 呈负相关，且 LIP mRNA 的 3′-UTR 存在与 miR-4561 种子区域互补的序列。在创伤弧菌（*Vibrio anguillarum*）感染过程中，miR-4561 抑制 LIP 表达并降低细菌清除能力。此外，supraneural body 细胞中 LIP 的表达对于革兰氏阴性免疫反应是必需的。过表达 miR-4561 还可诱导胚胎细胞凋亡，提示其在胚胎发育中的作用。

5. 这个案例对同类课题的参考价值

本研究展示了在非模式生物七鳃鳗中利用 Entranster 试剂进行体内 miRNA 转染的可行性，为研究进化保守的免疫调控机制提供了技术参考。实验中采用的剂量和检测方法可为类似组织特异性转染实验提供借鉴。对于需要进行 HEK293 全系转染、病毒包装或重组蛋白生产的实验，可参考转染试剂选型指南选择合适的产品。

6. 文献出处

论文题目：MicroRNA expression profile in Lampetra morii upon Vibrio anguillarum infection and miR-4561 characterization targeting lip

期刊：Communications Biology

DOI：10.1038/s42003-021-02525-z

原文献页:英格恩官网文献页