研究揭示细粒棘球蚴外泌体miR-71免疫调节功能

一项针对细粒棘球蚴外泌体miRNA的研究显示，egr-miR-71在寄生虫原头节分泌的外泌体中富集并具有生物学活性，可被细胞内化并调节绵羊外周血单核细胞（PBMCs）的免疫功能。该研究由课题组利用电转染方法将egr-miR-71 mimics导入绵羊PBMCs，发现其过表达倾向于抑制促炎细胞因子（IL-1α、IL-1β和TNF-α），并影响LPS/TLR4通路关键组分。论文发表于《Parasite》期刊，DOI为10.1051/parasite/2023060。

背景

囊型棘球蚴病（CE）是由细粒棘球蚴引起的人兽共患寄生虫病，对人和动物健康构成威胁。miRNA是一类参与寄生虫病致病过程的小非编码RNA，可能通过外泌体发挥作用。egr-miR-71已在CE患者血液中被鉴定为miRNA之一，但其分泌特征和功能尚不清楚。本研究聚焦外泌体egr-miR-71的分泌与生物学活性，以及其在绵羊PBMCs中的免疫调节功能。

方法

研究者从三只健康绵羊中，采用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离PBMCs。每个样本设三个重复，实验独立进行三次。在电转染实验中，细胞分为两组：转染egr-miR-71 mimics组和转染阴性对照构建体组。电转染使用Entranster TME电转液（Engreen），具体操作如下：取约1×10⁶个细胞，重悬于电转液中；将1.25 μL的egr-miR-71 mimics（100 nM）或阴性对照构建体（100 nM）加入每100 μL电转缓冲液中，混匀后加入4 mm间隙的电转杯；在150 V、25 μF、50 Ω条件下电转6 ms。电转后的样品立即置于含100 ng/mL LPS和10 ng/mL IFN-γ的RPMI-1640培养基中培养，并在转染后12 h和24 h收集细胞上清。

结果

研究显示，egr-miR-71在原头节分泌的外泌体中富集并具有生物学活性。含有egr-miR-71的外泌体容易被细胞内化，随后在共培养的绵羊PBMCs中引起细胞因子（IL-10和TNF-α）、一氧化氮（NO）以及LPS/TLR4通路关键组分（CD14和IRF5）的失调。类似地，egr-miR-71过表达也改变了免疫功能，但在细胞因子和关键组分的调节上表现出明显差异，更倾向于抑制促炎细胞因子（IL-1α、IL-1β和TNF-α）。这些结果表明，外泌体egr-miR-71具有生物学活性，并具备调节PBMCs免疫功能的能力，可能参与细粒棘球蚴感染过程中的免疫反应。

意义

该研究为寄生虫来源miRNA的免疫调节功能提供了新证据，并展示了电转染方法在绵羊PBMCs中的应用。实验中使用的电转参数和细胞数量可为类似原代免疫细胞电转实验提供参考，具体用量参考产品操作手册。

原文献页:英格恩官网文献页