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- 文章标题
英文标题：*ABHD8 antagonizes inflammation by facilitating chaperone-mediated autophagy-mediated degradation of NLRP3*
- 期刊与影响因子
- 期刊名称：Autophagy
- 影响因子：13.3（2023年数据）
- 出版信息：2024年8月18日在线发表，DOI: 10.1080/15548627.2024.2395158
- 文献概要
研究背景
NLRP3炎症小体是先天免疫系统中的关键复合物，其异常激活与多种炎症性疾病（如痛风、2型糖尿病、阿尔茨海默病等）密切相关。NLRP3蛋白水平的稳定是炎症小体激活的限制步骤，需被精确调控。
主要发现
本研究首次揭示ABHD8（α/β-水解酶结构域蛋白家族成员）在NLRP3炎症小体调控中的新功能：
- ABHD8与NLRP3相互作用：免疫共沉淀、共聚焦和FRET实验证实ABHD8特异性结合NLRP3，且该相互作用在炎症小体激活剂（如ATP、尼日利亚菌素）刺激下增强。
- ABHD8促进NLRP3降解：
- ABHD8过表达降低NLRP3蛋白水平（不影响mRNA），ABHD8缺失则稳定NLRP3蛋白。
- 通过溶酶体抑制剂（NH₄Cl、CQ）而非蛋白酶体抑制剂（CFZ）或巨自噬抑制剂（3-MA）阻断该降解，表明ABHD8通过溶酶体途径介导NLRP3降解。
- ABHD8通过CMA途径降解NLRP3：
- ABHD8促进NLRP3与HSPA8和LAMP2A的相互作用，而ABHD8缺失则破坏这一相互作用。
- 敲低HSPA8或LAMP2A可逆转ABHD8介导的NLRP3降解，证实ABHD8通过分子伴侣介导的自噬（CMA）途径促进NLRP3降解。
- ABHD8招募ZDHHC12促进NLRP3棕榈酰化：
- ABHD8作为支架蛋白，招募棕榈酰转移酶ZDHHC12至NLRP3，促进其棕榈酰化，这是CMA降解的关键步骤。
- ZDHHC12缺失或ABHD8缺失均导致NLRP3棕榈酰化水平降低和蛋白稳定性增加。
- ABHD8在体内抑制炎症：
- 在小鼠内毒素休克模型和铝佐剂腹膜炎模型中，ABHD8过表达显著降低IL-1β分泌、NLRP3蛋白水平及组织损伤。
- SARS-CoV-2 N蛋白破坏ABHD8-NLRP3相互作用：
- 新冠病毒N蛋白与ABHD8和NLRP3结合，干扰ABHD8-NLRP3相互作用，导致NLRP3蛋白积累和炎症小体过度激活。
研究结论
ABHD8通过招募ZDHHC12促进NLRP3棕榈酰化，进而通过CMA途径降解NLRP3，从而负向调控NLRP3炎症小体激活。SARS-CoV-2 N蛋白通过破坏ABHD8-NLRP3相互作用，促进过度炎症反应。
- 采用英格恩（Engreen）产品实验部分
本研究中，英格恩（Engreen） 的 Entranster™-in vivo 体内转染试剂用于小鼠尾静脉注射实验：
| 实验目的 | 操作细节 |
| ABHD8体内过表达 | 将空载体（EV）或Flag-mABHD8质粒（40 μg/只）与Entranster™-in vivo转染试剂混合，按照说明书操作，通过尾静脉注射入小鼠体内。 |
| 实验模型 | LPS诱导的内毒素休克模型（25 mg/kg，12 h）和铝佐剂诱导的腹膜炎模型（700 μg，12 h） |
| 检测指标 | 血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平；肺组织NLRP3蛋白水平；肺组织H&E染色评估损伤；腹腔灌洗液细胞因子水平 |
原文描述：
“For in vivo transfection: empty vector (EV) or Flag-mouse ABHD8 (Flag-mABHD8, 40 μg mouse; constructed in this study) was injected into the tail veins of mice in the presence of in vivo DNA transfection reagent (Entranster-in vivo; Engreen, 18668-11-2) , according to the manufacturer’s protocols and previous studies.”
该试剂有效实现了ABHD8在小鼠体内的过表达，证实了ABHD8对NLRP3炎症小体的抑制作用。
- 实验意义
科学意义
- 机制创新：首次发现ABHD8作为CMA途径的调控因子，通过促进NLRP3棕榈酰化介导其降解，揭示了ABHD8-ZDHHC12-NLRP3调控轴在炎症调控中的新机制。
- 拓展ABHD家族功能：ABHD8此前功能研究较少，本研究首次将其与NLRP3炎症小体调控及CMA途径联系起来。
- 疾病关联：揭示了新冠病毒N蛋白通过干扰ABHD8-NLRP3相互作用促进过度炎症的机制，为COVID-19的病理机制提供了新见解。
应用价值
- 治疗靶点：ABHD8可能成为NLRP3相关炎症性疾病（如痛风、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病）的潜在治疗靶点，通过激活ABHD8功能或模拟其作用，可抑制NLRP3炎症小体过度激活。
- 药物开发：ABHD8的小分子激动剂或ZDHHC12活性增强剂可能用于治疗NLRP3驱动的炎症性疾病。
- COVID-19治疗启示：恢复ABHD8功能或阻断N蛋白与ABHD8的相互作用，可能减轻新冠病毒感染引起的过度炎症反应。