GSDMD C端抗病毒免疫机制研究

文献标题

中文：GSDMD C端在对抗I型干扰素信号中被忽视的作用
英文：The Neglected Role of GSDMD C-Terminal in Counteracting Type I Interferon Signaling

影响因子

该文献发表于 Advanced Science（《先进科学》），该期刊2023年影响因子为 15.1（2024年尚未公布，预计仍保持高位）。

研究背景：GSDMD是细胞焦亡（pyroptosis）的关键执行蛋白，其N端（GSDMD-NT）形成膜孔导致细胞裂解和炎症因子释放，而C端（GSDMD-CT）的功能长期以来被忽视。

核心发现

• GSDMD 被炎症 Caspase 切割后释放的 C-端片段（GSDMD-CT）而非经典的 N-端孔道形成片段（GSDMD-NT）是病毒免疫逃逸的关键“刹车”。
• 机制：GSDMD-CT 同时结合 RIG-I 与 TBK1，并招募 E3 泛素连接酶 TRIM28，催化 RIG-I K48 链泛素化（K181 位）及 TBK1 K27 链泛素化（K487 位），进而被自噬受体 NDP52/TOLLIP 识别，导致两条分子选择性自噬降解，显著抑制 IFN-β 产生。
• 功能：小鼠水平 GSDMD 缺失增强抗病毒能力；回补 GSDMD-CT 则加重 EMCV 感染、降低 IFN-β 表达并提高病毒载量。
• 关键位点：P414、Q416、E459 三点突变即可让 GSDMD-CT 丧失抑制 IFN-I 的能力，为干预提供靶点。

 应用英格恩产品（Entranster-in vivo）的实验部分
实验步骤：

1. 将Flag标记的小鼠GSDMD-CT质粒稀释至1 µg/µL。
2. 准备核酸稀释液（50 µL质粒 + 50 µL 10%葡萄糖）和转染稀释液（100 µL Entranster-in vivo）。
3. 静置10分钟后混合，再静置10分钟。
4. 通过尾静脉注射至GSDMD-KO小鼠体内。
5. 24小时后感染EMCV病毒，观察表型。

作用：该方法成功实现了GSDMD-CT在小鼠体内的过表达，验证了其抑制IFN-I信号、增强病毒易感性的功能。

实验意义

1. 技术层面：证明 Entranster-in vivo 可在 24 h 内高效、低毒地将较大质粒（~6 kb）递送至小鼠主要免疫器官，满足“快速表达-快速感染”急毒模型需求，为体内功能片段验证提供可重复方案。
2. 科学层面：首次用活体过表达手段明确 GSDMD-CT 是病毒“帮凶”，填补了“炎性小体-自噬-干扰素”交叉调控空白；为后续筛选 P414/Q416/E459 小分子阻断剂奠定动物实验平台。
3. 转化层面：该模型可直接用于评价靶向 GSDMD-CT 的抑制剂、寡核苷酸或 PROTAC 分子，若联合英格恩递送系统，可实现“成药性-体内验证”一体化，缩短抗病毒佐剂或免疫调节药物研发周期。