英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
标题
Programming of Regulatory T Cells In Situ for Nerve Regeneration and Long-Term Patency of Vascular Grafts
（通过原位编程调节性T细胞促进神经再生与血管移植物的长期通畅性）
影响因子
该研究发表于 Research 期刊，2022年影响因子约为 11.0（根据期刊官网及近年趋势估算）。
文献概要
本研究旨在解决小直径组织工程血管移植物（sdTEVGs）在移植后因免疫排斥和炎症反应导致的神经再生障碍和血管再狭窄问题。研究团队设计了一种基于 CRISPR/dCas9 的纳米递送系统，通过靶向调节性T细胞（Treg细胞）表面标志物CD25，上调TET2基因表达，稳定Foxp3表达，从而增强Treg细胞的免疫抑制功能。该系统通过调控局部炎症微环境，促进巨噬细胞表型转变（减少CCR2+巨噬细胞，增加神经生长因子分泌），优化IL-6浓度，最终实现神经再生和血管移植物的长期通畅。
采用英格恩（Engreen）产品的实验部分
本研究使用了 Engreen公司 的纳米转染试剂 Entranster™-H4000（简称H4000），用于构建靶向Treg细胞的CRISPR/dCas9纳米递送系统。具体实验步骤如下：
- H4000-CD25/dCas9纳米颗粒制备：
- 将CD25-PE抗体与H4000通过EDC偶联反应结合，形成靶向Treg细胞的载体（H4000-CD25）。
- 将dCas9质粒与H4000或H4000-CD25按比例混合，形成纳米复合物（H4000/dCas9 或 H4000-CD25/dCas9）。
- 体外转染与功能验证：
- 使用H4000-CD25/dCas9转染Treg细胞，通过流式细胞术和ELISA验证转染效率、TET2表达上调、抗炎因子（IL-10、IL-35、TGF-β）分泌增加。
- 混合淋巴细胞反应实验显示，转染后的Treg细胞显著抑制T细胞增殖。
- 体内递送与缓释系统构建：
- 将H4000-CD25/dCas9通过静电层层自组装方法修饰于脱细胞血管基质外膜，实现局部缓释（持续30天）。
- 通过荧光标记（Cy3、DIR）验证纳米颗粒在体内外的缓释性能。
🌟 实验意义：
- 实现了Treg细胞的精准编程：
- 通过CRISPR/dCas9系统上调TET2表达，稳定Foxp3去甲基化，增强Treg细胞的免疫抑制功能。
- CD25抗体修饰显著提高了靶向性和转染效率，避免脱靶效应。
- 调控局部免疫微环境：
- 激活的Treg细胞分泌更多抗炎因子（IL-10、IL-35、TGF-β），抑制过度炎症反应。
- 促进巨噬细胞向CCR2−表型转化，降低IL-6水平至适宜神经再生的范围（50–100 ng/mL）。
- 促进神经再生与血管重塑：
- 通过调节免疫微环境，促进雪旺细胞与轴突的结合，增强神经再生。
- 实现血管外膜的神经再支配，改善血管稳态，防止内膜增生和血栓形成。
- 提供新型组织工程策略：
- 该研究展示了一种通过局部免疫调控促进组织再生的新方法，具有广泛的移植应用潜力。
- 使用非病毒载体（如H4000）提高了安全性，避免了病毒载体的潜在风险。