PD-1沉默削弱CAR-T细胞抗肿瘤功能

文献标题

PD-1 silencing impairs the anti-tumor function of chimeric antigen receptor modified T cells by inhibiting proliferation activity

影响因子

8.676（Journal for ImmunoTherapy of Cancer，2019年）

 文献概要

本研究采用shRNA基因敲低技术，构建PD-1持续沉默的CD19-CAR-T细胞模型，系统评估长期PD-1阻断对CAR-T细胞增殖、分化及体内外抗肿瘤功能的影响。实验结果显示，长期PD-1敲低显著抑制CAR-T细胞增殖活性，加速早期分化并阻碍效应记忆T细胞形成，最终导致体内外抗肿瘤功能下降。研究提示PD-1信号在维持T细胞稳态及持续抗肿瘤活性中具有重要作用，为临床PD-1阻断策略的优化提供理论依据。

使用英格恩产品的实验部分

在CAR-T细胞制备过程中，采用Envirus™-LV（Engreen Biosystem）转染试剂提高慢病毒感染效率：

将激活后的PBMCs与慢病毒混合，850 g离心2小时，同时加入Envirus™-LV促进病毒进入T细胞。

感染后，CAR-T细胞在含IL-2（或IL-7/IL-15/IL-21）培养基中扩增，用于后续功能分析。

实验意义

1. 挑战传统认知：
   • 传统认为PD-1阻断可增强T细胞功能，但本研究通过长效PD-1沉默发现，长期阻断反而削弱CAR-T细胞的增殖能力和抗肿瘤效果。
2. 机制深入：
   • PD-1沉默导致T细胞早期分化加速，但阻碍其向效应记忆T细胞分化，从而影响长期增殖与持久性。
3. 临床启示：
   • 提示PD-1信号并非完全负面，可能对维持T细胞稳态和功能至关重要；
   • 对当前广泛开展的PD-1联合CAR-T临床试验提出警示与反思，强调需谨慎评估长期PD-1阻断的副作用。
4. 方法创新：
   • 使用双启动子慢病毒系统实现PD-1 shRNA与CAR共表达，确保在单细胞水平上研究PD-1沉默效应，方法可靠且具有推广价值。

总结

该研究通过严谨的体内外实验证明，长效PD-1沉默反而损害CAR-T细胞的增殖与抗肿瘤功能，揭示了PD-1在T细胞稳态中的复杂作用，对优化免疫治疗策略具有重要指导意义。