做慢病毒滴度测定实验，请问是所有的都用293t细胞来做，还是说我要在别的细胞上做稳转株，我用别的细胞去摸病毒滴度就可以呀？

核心原则

1. 标准物理滴度测定：强烈推荐使用293T细胞。

2. 功能性滴度测定/特定应用验证：使用你的目标细胞。

3. 详细解释

   1. 为什么推荐293T细胞测定物理滴度？

      • 高易感性： 293T细胞对慢病毒感染非常敏感，因为它们高表达慢病毒进入所需的受体（如LDL受体）。

      • 高转导效率： 它们通常能达到非常高的转导效率（>80%甚至90%+），这使得检测阳性细胞、计算滴度变得容易和准确。

      • 标准化和可比性： 293T是慢病毒生产和滴度测定的金标准细胞系。使用它可以获得一个相对标准的“物理滴度”（Physical Titer， TU/mL），反映病毒颗粒中具有感染293T细胞能力的病毒颗粒数量。这个数值对于比较不同批次病毒的生产效率、确定基本感染单位量非常重要。

      • 灵敏度高： 能检测到较低滴度的病毒，避免低估你的病毒产量。

      • 结果快速稳定： 293T生长快，状态稳定，实验结果重现性好。

   2. 什么时候需要用目标细胞测定功能性滴度？

      • 目标细胞难转导： 如果你的目标细胞（比如某些原代细胞、干细胞、神经元🧠、免疫细胞等）本身对慢病毒不敏感（表达受体少、有天然屏障、细胞周期限制等），那么用293T测得的滴度（物理滴度）不能准确反映病毒在目标细胞上的实际感染能力。

      • 需要精确评估感染效率： 当你需要知道在目标细胞上达到特定转导效率（比如50%阳性）需要多少病毒量时，必须在目标细胞上进行滴度测定或感染预实验。

      • 构建稳转株： 这正是你提到的情况！ 如果你计划在目标细胞上构建稳转株，那么了解病毒在该特定细胞上的实际感染效率至关重要。仅依赖293T的滴度可能会导致：

        • 过度感染： 如果目标细胞比293T敏感，用了按293T滴度计算的量，可能造成MOI过高，导致细胞毒性或筛选压力下克隆过度死亡。

        • 感染不足： 如果目标细胞比293T难感染，用了按293T滴度计算的量，可能MOI太低，导致阳性细胞比例太低，筛选困难或无法获得足够多的稳转克隆。

      • 功能性滴度： 在目标细胞上测得的滴度称为“功能性滴度”（Functional Titer on Target Cells），它更能反映病毒在你的实际应用场景中的效力。

      • 结论

        • 做慢病毒滴度测定（物理滴度）： 必须用293T细胞。 这是标准方法，提供基础且可比较的病毒量信息。

        • 为了在目标细胞上成功构建稳转株： 必须用你的目标细胞进行感染预实验，计算该细胞上的功能性滴度或直接确定最佳感染条件（稀释度/体积）。 不能只依赖293T的滴度结果。

        简单来说：先测293T滴度（知道你有多少“子弹”），再用目标细胞摸条件（知道打中你的“靶子”需要多少“子弹”和怎么打）。 两步都做好，构建稳转株的成功率会大大提高！