英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1.（IF9.438）文献名称：ceRNA crosstalk mediated by ncRNAs is a novel regulatory mechanism in fish sex determination and differentiation
实验动物：商品鱼
研究内容：
- 该研究揭示了非编码RNA（ncRNA）通过ceRNA机制调控鱼类性别决定与分化的新机制。
- 发现circRNA（circdmrt1）和lncRNA（AMSDT）通过竞争性结合miR-196，上调雄性相关基因（如gsdf），促进睾丸分化。
- 研究中使用了英格恩的Entranster TM-in vivo进行体内转染，将siRNA和过表达载体递送至鱼类性腺组织，验证了基因功能。
- 应用效果:通过高效转染，成功敲低dmrt1和circdmrt1，证实了其在性别决定中的关键作用，为ceRNA调控网络提供了实验支持。
- 2.（IF9.2）文献名称：Granulin as an important immune molecule involved in lamprey tissue repair and regeneration by promoting cell proliferation and migration
实验动物：七鳃鳗
研究内容：
- 研究鉴定了七鳃鳗中的程序性蛋白（PGRN）家族基因，发现其通过促进细胞增殖和迁移参与免疫应答及组织修复。
- Lr-PGRN-S1在皮肤和脊髓损伤后显著上调，并通过调控MAPK、Wnt等通路促进修复。
- 使用英格恩的Entranster TM-in vivo将siRNA递送至七鳃鳗胚胎和脊髓，实现基因敲低，验证了Lr-PGRN-S1的功能。
- 应用效果：高效转染技术为低等脊椎动物的基因功能研究提供了可靠工具，解决了传统方法在无脊椎动物中效率低的问题。
3文献名称：CLONING AND FUNCTIONAL ANALYSIS OF STING IN CHINESE SOFT-SHELLED TURTLE (PELODISCUS SINENSIS)
实验动物：中华螯
研究背景与目的：
STING（干扰素基因刺激因子）是先天免疫信号通路中的重要接头分子，在抗病毒、细菌等病原感染中发挥关键作用。本研究旨在克隆中华鳖STING基因（PsSTING），分析其分子特征、组织表达模式及免疫功能，为中华鳖免疫防病机制提供理论基础。
体内siRNA干扰实验：使用英格恩的Entranster™-invivo转染试剂将siRNA递送至中华鳖体内，成功实现PsSTING基因的沉默，验证了其在先天免疫中的功能。
结论：
PsSTING基因参与调控中华鳖的先天免疫反应，尤其在抗病原感染中发挥重要作用。本研究为爬行动物STING基因的功能研究提供了新视角，并为中华鳖疾病防控提供了理论依据
4文献名称：Identification of tumor necrosis factor receptor 1 and its association with LPS-induced apoptosis in Onchidium reevesii
实验动物：海蛞蝓
- 研究内容：
该研究克隆并鉴定了海蛞蝓（Onchidium reevesii）中的肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）基因（OrTNFR1），并探讨了其在LPS（脂多糖）诱导的细胞凋亡中的作用。研究发现，LPS刺激可显著上调OrTNFR1在肝胰腺、血液和肠道中的表达，而通过siRNA技术抑制OrTNFR1的表达可有效减少LPS诱导的细胞凋亡及凋亡相关蛋白Caspase的表达。 - 研究中使用了Entranster™-in vivo（Engreen Biosystem Co., Ltd, Beijing, China）进行siRNA的体内转染，成功抑制了OrTNFR1的表达，验证了其在免疫调控中的功能。
- 意义：该研究揭示了TNFR1在海蛞蝓先天免疫中的重要作用，为理解软体动物的免疫防御机制提供了新视角。
5 文献名称：Wnt Signaling Pathway Linked to Intestinal Regeneration via Evolutionary Patterns and Gene Expression in the Sea Cucumber Apostichopus japonicus
实验动物：海参
关键发现:
- 信号通路的核心作用: 研究发现Wnt信号通路在海参（Apostichopus japonicus）肠道再生过程中发挥关键作用。该通路是再生相关信号通路中最保守的，并且在再生过程中受到正选择压力，其基因表达显著上调。
- 关键基因的调控:上游基因（如Wnt7、Fz7和Dvl）在再生早期显著上调，这些基因的正选择特征表明其在肠道再生启动中的重要性。
- RNA干扰验证:通过RNA干扰（RNAi）实验敲低Wnt7和Dvl的表达后，海参的肠道再生显著受到抑制，进一步证实了这些基因在再生中的功能必要性。
- RNA干扰（RNAi）: 研究中使用了英格恩的转染试剂Entranster™-in vivo进行RNAi实验，成功敲低了目标基因（Wnt7和Dvl）的表达，验证了其在肠道再生中的关键作用。
意义:
生态与进化意义:揭示了Wnt信号通路在再生动物中的保守性和正选择特征，为理解无脊椎动物再生能力的进化机制提供了新视角。
生物医学应用: 研究结果为组织再生和修复的分子机制提供了重要线索，可能为再生医学和抗衰老研究提供新的靶点。
6 文献名称：Molecular characteristics and abundance of insulin-like androgenic gland hormone and effects of RNA interference in Eriocheir sinensis
实验动物：中华绒螯蟹
关键发现:
- 基因克隆与序列分析:研究成功克隆了中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）胰岛素样雄激素（Es-IAG）的全长cDNA序列（1,392 bp），编码151个氨基酸的分泌蛋白。该蛋白具有信号肽、糖基化位点和磷酸化位点，表明其通过翻译后修饰发挥功能。
- 发育阶段表达分析: Es-IAG mRNA在囊胚期和眼点期胚胎中表达量最高，且在幼蟹I期至III期显著上调，提示该激素在早期胚胎发育和性别分化中起重要作用。
- RNA干扰效应: 使用siRNA-391通过体内转染（Entranster™-in vivo）成功抑制Es-IAG表达（抑制率达66.7%），并在幼蟹III期至V期处理中诱导10%的雄性个体转化为“新雌性”，证实了Es-IAG在性别分化中的关键作用。
意义:
理论意义: 揭示了Es-IAG在中华绒螯蟹性别分化和胚胎发育中的调控机制，为甲壳动物内分泌学研究提供了新视角。
应用价值: 通过RNAi技术实现性别调控，为单性育种（如全雄性养殖）提供了技术基础，有望提升养殖经济效益。
总结
- 技术优势：
- 英格恩的Entranster TM-in vivo在水产动物（如鱼类，七鳃鳗，蟹，海蛞蝓，海参，鳖类等）中表现出高效转染能力，支持基因功能验证和机制研究。
- 适用于复杂模型，解决了低等脊椎动物转染难度大的问题。
- 学术贡献：
- 研究结果揭示了在发育与免疫中的新机制，为水产育种和疾病治疗提供了潜在靶点。