英格恩体内转染试剂助力几种常见脑部疾病的研究

文章1：LncRNA TUG1 Repressed Angiogenesis by Promoting the Ubiquitination of HuR and Inhibiting Its Nuclear Translocation in Cerebral Ischemic Reperfusion Injury

期刊：Advanced Science

影响因子：14.3

研究背景：脑缺血再灌注损伤

文章概要：该研究探讨了长链非编码RNA（lncRNA）TUG1在脑缺血再灌注损伤（CIRI）中通过调控HuR蛋白的泛素化和核转位来抑制血管生成的分子机制。研究通过体内外实验证实，TUG1通过直接结合HuR蛋白，抑制其核转位并促进其泛素化降解，从而降低VEGFA mRNA的稳定性，最终抑制血管生成并加重CIRI。相反，HuR通过结合VEGFA mRNA增强其稳定性，促进血管生成并减轻CIRI。研究揭示了TUG1-HuR-VEGFA轴在CIRI中的关键作用，为开发新的治疗靶点提供了理论依据。

采用英格恩产品实验：

通过脑室内注射（intracerebroventricular injection）将相关质粒（如TUG1过表达或敲低载体）递送到小鼠脑部，使用了英格恩的体内转染试剂进行。

实验意义机制解析

揭示了TUG1通过调控HuR的泛素化和核转位抑制VEGFA mRNA稳定性的新机制，为理解CIRI中血管生成的调控提供了新视角。

治疗靶点

TUG1和HuR作为潜在的干预靶点，为开发促进血管生成、减轻CIRI损伤的药物提供了方向。例如，抑制TUG1或激活HuR可能成为治疗缺血性卒中的新策略。

技术创新

结合多种分子生物学技术（如FISH、RIP、CLIP等），验证了TUG1与HuR的直接相互作用，为lncRNA与RBP相互作用的研究提供了方法学参考。

临床转化潜力

研究结果可能为缺血性卒中患者的治疗提供新的生物标志物或药物靶点，尤其是针对血管修复和神经功能恢复的干预措施。

文章2：CX3CL1/CX3CR1 axis attenuates early brain injury via promoting the delivery of exosomal microRNA-124 from neuron to microglia after subarachnoid hemorrhage

期刊：Journal of Neuroinflammation

影响因子：9.3

研究背景：蛛网膜下腔出血

文章概要：

该研究探讨了CX3CL1/CX3CR1轴在蛛网膜下腔出血（SAH）后通过促进神经元来源的外泌体微小RNA-124（miR-124）向小胶质细胞的传递，从而减轻早期脑损伤（EBI）的机制。研究发现，SAH后CX3CL1和CX3CR1的表达显著降低，导致miR-124的传递减少，进而激活小胶质细胞并引发神经炎症。通过体外和体内实验，研究证实CX3CL1/CX3CR1轴的过表达能够恢复miR-124的传递，抑制小胶质细胞活化，减轻炎症反应，并改善神经功能缺损。这一发现为SAH的治疗提供了新的潜在靶点。

采用英格恩（Engreen）产品实验部分

使用了英格恩的Entranster™-in vivo DNA转染试剂（Engreen, China），将CX3CL1和CX3CR1的质粒共转染到大鼠脑内。具体步骤包括将质粒与转染试剂混合后，通过脑室内注射（intracerebroventricular injection）递送，以验证CX3CL1/CX3CR1轴的功能。

实验意义

机制解析

揭示了CX3CL1/CX3CR1轴通过促进外泌体miR-124从神经元向小胶质细胞的传递，抑制小胶质细胞活化和神经炎症的新机制。

治疗靶点

CX3CL1/CX3CR1轴和miR-124被确认为SAH后减轻脑损伤的潜在干预靶点，为开发新型抗炎和神经保护药物提供了方向。

临床转化潜力

研究结果为SAH患者的治疗提供了新的思路，尤其是通过调控CX3CL1/CX3CR1轴或外泌体miR-124的传递，可能改善患者预后。

技术创新

结合体内转染技术和外泌体分析，为神经炎症和脑损伤的研究提供了方法学参考。

文章3： DKK3 attenuates JNK and AP-1 induced inflammation via Kremen-1 and DVL-1 in mice following intracerebral hemorrhage

期刊：Journal of Neuroinflammation

影响因子：9.3

研究背景：脑出血

文章概要：

该研究探讨了Dickkopf-3 (DKK3) 通过Kremen-1和DVL-1减轻小鼠脑出血（ICH）后JNK和AP-1诱导的炎症的机制。研究发现，DKK3通过抑制JNK/AP-1信号通路，减少炎症反应，从而改善脑出血后的神经功能缺损和脑水肿。实验采用小鼠ICH模型，通过重组DKK3（rDKK3）治疗、siRNA敲降Kremen-1和DVL-1等方法，验证了DKK3的神经保护作用及其分子机制。

采用英格恩（Engreen）产品实验部分

在实验中，研究人员使用了英格恩公司的转染试剂Entranser™进行siRNA的递送。具体步骤如下：

1. siRNA递送：Kremen-1 siRNA和DVL-1 siRNA通过Entranser™转染试剂稀释后，通过脑室内注射（ICV）递送到小鼠体内。siRNA的递送在ICH诱导前24小时完成，以敲降目标基因的表达。
2. 实验设计：通过Western blot和免疫荧光技术，验证了siRNA敲降的效果，并进一步研究了DKK3通过Kremen-1和DVL-1抑制炎症的机制。

 

实验意义

1. 神经保护作用：DKK3通过抑制JNK/AP-1信号通路，显著减轻了ICH后的炎症反应，改善了小鼠的神经功能和行为表现。这为ICH的治疗提供了新的潜在靶点。
2. 机制阐明：研究揭示了DKK3通过Kremen-1和DVL-1发挥作用的分子机制，为理解DKK3在炎症调控中的功能提供了重要依据。
3. 转化医学价值：实验中使用英格恩的转染试剂成功实现了siRNA的体内递送，为后续基因治疗研究提供了技术支持。此外，DKK3的神经保护作用可能为开发新型抗炎药物提供方向。
4. 临床应用潜力：DKK3或其类似物可能成为治疗ICH和其他神经炎症疾病的候选药物，具有重要的临床转化前景。

文章4 : D-Penicillamine Reveals the Amelioration of Seizure-Induced Neuronal Injury via Inhibiting Aqp11-Dependent Ferroptosis
期刊: Antioxidants
影响因子: 7.675

研究背景:癫痫病

主要发现

1. DPA改善神经元存活：在红藻氨酸（KA）诱导的小鼠癫痫模型中，DPA显著提高了神经元存活率，并降低了铁死亡相关标志物（ACSL4、Ptgs2基因和脂质过氧化物LPO水平）。
2. 抑制铁死亡：在谷氨酸或erastin诱导的铁死亡细胞模型中，DPA显著抑制了神经元铁死亡。
3. 分子机制：RNA-seq分析发现，DPA通过上调水通道蛋白基因Aqp11发挥抗铁死亡作用。体内实验证实，敲低Aqp11会消除DPA对铁死亡的抑制作用。

英格恩（Engreen Biosystem）产品应用部分

siRNA体内转染：

使用英格恩的Entranster™-in vivo转染试剂（货号：18668-11-1），将Aqp11 siRNA递送至小鼠脑内。

实验验证了siRNA敲低Aqp11后，DPA对铁死亡的抑制作用被显著削弱（图6H-K）。

关键结果：

Aqp11 siRNA（序列3）在体内外均有效降低Aqp11表达；敲低Aqp11后，DPA对KA诱导的铁死亡标志物（ACSL4、COX-2、Ptgs2 mRNA和LPO水平）的调控作用被逆转。

研究意义

1. 药物重定位：DPA作为一种已获批的药物，可能被重新用于治疗癫痫等发作性疾病。
2. 新机制揭示：首次提出Aqp11依赖的铁死亡抑制是DPA神经保护作用的关键机制。
3. 潜在应用：为靶向铁死亡的抗癫痫药物开发提供了新思路。

文章5： TMEM16F may be a new therapeutic target for Alzheimer’s disease

期刊：Neural Regeneration Research

影响因子: 6.058
研究背景：阿尔茨海默病

主要结果：

1. T改善认知功能：APP/PS1小鼠的空间记忆能力显著提升。
2. 促进微胶质细胞向M2表型极化：减少促炎因子（如IL-6、IL-1β）的释放，增加抗炎因子（如IL-4）的表达。
3. 抑制NLRP3炎症小体激活：降低NLRP3、ASC和pro-caspase1的表达，减少IL-1β和IL-18的分泌。
4. 减轻神经元损伤：减少Aβ斑块沉积和神经元凋亡，改善脑组织病理形态。

采用英格恩产品实验部分

研究中使用了英格恩（Engreen Biosystem）的Entranster™-in-vivo（货号18668-11-1）作为siRNA的体内转染试剂，用于将siRNA-TMEM16F递送至小鼠脑组织。实验步骤如下：

1. siRNA制备: siRNA-TMEM16F（5 μg）溶于5 μL无RNA酶水，与10 μL转染试剂混合。
2. 立体定向注射: 将混合物以0.2 μL/min的速度注射至小鼠双侧海马体（坐标：X轴±2 mm，Y轴-2.4 mm，Z轴-1.7 mm）。
3. 后续处理: 首次注射后第3天和第6天重复注射，第7天进行行为学测试。

实验意义

揭示TMEM16F在AD中的作用机制：首次证明TMEM16F通过调控微胶质细胞极化和NLRP3炎症小体参与AD的神经炎症过程，为理解AD的发病机制提供了新视角。

提出潜在治疗靶点：TMEM16F的抑制可能成为AD治疗的新策略，尤其是针对神经炎症的干预。

为开发新型药物提供依据：研究结果为开发靶向TMEM16F的药物（如siRNA或小分子抑制剂）提供了实验基础，可能为AD患者带来新的治疗选择。

拓展对其他神经系统疾病的启示：TMEM16F的调控机制可能也适用于其他神经退行性疾病（如帕金森病、肌萎缩侧索硬化症等）的研究和治疗。

总之，该研究不仅深化了对AD神经炎症机制的理解，还为开发新的治疗方法提供了重要线索。

文章6：Single-cell and Spatial Transcriptomics Reveals Ferroptosis as The Most Enriched Programmed Cell Death Process in Hemorrhage Stroke-induced Oligodendrocyte-mediated White Matter Injury

期刊：International Journal of Biological Sciences

影响因子: 6.5
研究背景：出血性脑卒中

文章概要：

该研究通过单细胞转录组（scRNA-seq）和空间转录组（spatial RNA-seq）技术，揭示了铁死亡（ferroptosis）是出血性卒中（ICH）后少突胶质细胞介导的白质损伤中最主要的程序性细胞死亡（PCD）形式。

主要发现：

1. 铁死亡的主导性：在ICH后1小时即可检测到铁死亡，24小时达到高峰，并持续至7天，主要影响成熟少突胶质细胞。
2. 关键分子机制：LCN2（lipocalin-2）阳性的小胶质细胞通过CSF1/CSF1R通路诱导少突胶质细胞铁死亡，导致神经功能缺损。
3. 治疗潜力：抑制LCN2或CSF1/CSF1R通路可减轻铁死亡及神经损伤，为ICH治疗提供新靶点。

采用英格恩（Engreen）产品的实验部分

使用英格恩的Entranster™-in vivo RNA转染试剂（货号：Engreen, Shanghai, China），将si-LCN2或si-NC（阴性对照）溶解后，通过立体定向注射至大鼠脑室。

实验设计：在ICH诱导前48小时注射siRNA，验证LCN2沉默对铁死亡及神经行为的影响。

研究意义：

首次明确铁死亡在ICH中的时空动态及细胞特异性。

提出LCN2/CSF1R通路为潜在治疗靶点，具有转化医学价值。