英格恩技术博客 专注转染等实验

质粒DNA转染实验的要点

1, 质粒的构建:启动子的选择
启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。
2, 质粒的大小和质量
线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些促进DNA凝聚的成分,使得DNA形成转染复合物时更致密一些,更容易转染一些。纯化质粒的质量也会影响转染效率,一定要选择高质量的质粒。
3, 质粒DNA的浓度和量
既然质粒纯化已经不成问题,初学者通常都不会在乎甚至愿意多加点DNA,但是要注意的是,DNA量过少固然转染效率不高,DNA量过多同样会降低转染效率。所以预实验需要按照说明书的要求,按一定比例混合适量的质粒DNA和转染试剂。有的转染试剂要求DNA的量多些,有的转染试剂效率高只要很少DNA。
4, 转染试剂的选择
在确定了质粒的质量之后,就要考虑转染试剂的选择了。目前大多数用的是脂质体类的转染试剂,但这类试剂的毒性较大,转染效率低,最好选择非脂质体的转染试剂,如engreen的Entranster-H试剂。

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