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siRNA转染效率低的原因有哪些?

1. RNA与转染试剂比例不佳
   由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。
2. 细胞密度不佳
   调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高。由于siRNA沉默时效性的影响,转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测,转染后48-72小时才能进行蛋白检测。如果转染时铺板密度较高,细胞一方面转染效果不理想,直接影响沉默效果和数据可靠性,另一方面,48小时甚至更长时间后,沉默检测最佳点时,过于密集的细胞将影响细胞状态,从而影响实验结果。
3. RNA效率不高
   选择最优RNA,并采用已知高效的RNA做对照。siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA,siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。
4.转染试剂不合适
   选择专门针对siRNA转染的试剂,如Entranster-R试剂。

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