英格恩技术博客 专注转染等实验
主页 / 细胞转染 / 细胞转染效率低的原因是什么?

细胞转染效率低的原因是什么?

转染效率低的原因可从以下几方面找:
1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策:用无血清培养基或Opti-MEM培养基。
2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策:对大多数细胞而言,质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3,一般要做优化实验,比例从1:0.5-1:5 逐一检测。
3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策:用好的质粒纯化试剂确保质粒DNA质量,正确保存,确保质粒DNA不被降解。
4.转染试剂选择不当。建议选用效率高,毒性低的转染试剂,比如engreen的Entranster试剂。
5.细胞密度不是最优,优化细胞密度。
6.混和加入细胞中不含血清。在转染过程中使用含有血清的培养基,细胞状态良好有利于转染效率的提高。
7 .转染体系中含有抑制物 转染体系中不应包含EDTA、柠檬酸、磷酸盐、RPMI、硫酸软骨素、透明质酸酶、硫酸葡萄糖聚酶及硫酸化蛋白聚糖
8.检验转染效率及表达的方法有问题 使用报告基因来检测转染效率,报告基因使你确定目标基因的表达
9.启动子及增强子不被包装细胞识别。确认你构建质粒上的启动子增强子与靶细胞相容。
10.转染试剂保存不正确,转染试剂保存在4℃。

Check Also

悬浮细胞为什么不容易转染?

   &n …

发表评论

电子邮件地址不会被公开。 必填项已用*标注

*