英格恩技术博客 专注转染等实验

提高PCR特异性的策略有哪些?

1、巣式pcr(Nest-PCR)可增加稀有靶序列的灵敏度;降低了扩增多个靶位点的可能性;提高PCR特异性
2、递减PCR(Touch Down PCR):前几个循环使用严谨的退火条件提高特异性;循环设在比估算的Tm高大约5℃的退火温度下开始,然后每个循环降低1-2℃,直到退火温度低于Tm 5℃ 。适合用于AFLP、DNA指纹分析等。
3、热启动PCR:抑制一种基本成分延迟DNA合成,直到PCR仪到达变性温度。如在冰上配制PCR反应液以抑制Taq酶活性,后将其置于预热的PCR仪中。
4、使用PCR增强剂:甲酰胺,DMSO,甘油,甜菜碱等可以降低熔解温度,有助于引物退火,辅助DNA聚合酶延伸通过二级结构区。但是增强剂的浓度要适当。
5、可使用engreen的PCR试剂,添加改良的DNA聚合酶,大大提高扩增产物的特异性和保真性。

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