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RNA转染

siRNA转染效率不理想的原因有哪些?

siRNA转染效率不理想,常见的原因有: 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率 …

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siRNA转染效率不理想怎么办?

siRNA转染效率不理想,常见的原因有: 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率 …

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siRNA细胞转染应注意的事项

为了达到高的转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点: 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …

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siRNA转染实验的几点建议

为了达到高的转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点: 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …

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siRNA细胞转染操作步骤

下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下siRNA转染步骤(24孔板) 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那 …

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RNA转染与Cav3通过Wnt信号通路与骨质疏松大鼠模型骨形成研究

      骨质疏松症是一种以骨密度和骨强度降低为特征的疾病,常见于老年人。Caveolin-3(Cav3)是caveolae膜结构域的主要结构蛋白,已被报道可参与细胞信号传导和维持细胞结构。现分享一篇RNA转染(entranster)与Cav3通过Wnt信号通路对骨质疏松大鼠模型骨形成的影响研究的文献,以供参考。 文献地址:https://link.spr …

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细胞铺板密度对于siRNA转染为什么很重要?

       RNA转染试剂Entranster-R4000成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高,一些试剂由于本身毒性的影响,太低的细胞数量时毒性明显,所以会要求较高的细胞密度(汇合度),顺便说一句,看一个转染试剂 …

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siRNA转染效率低的原因有哪些?

1. RNA与转染试剂比例不佳    由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳    调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这 …

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siRNA转染至细胞有哪些方法?

       siRNA导入细胞有以下几种方法:化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素:细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术(Entranster)是最为常用的方法,而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …

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