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qPCR

如何提高qPCR反应的灵敏度和特异性?

1. 首先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。 2. RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。 3. 为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。 4. 使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。 5. 若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。 6. 设计引物时,避免在引物3’端含有 …

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如何提高qPCR反应的灵敏度与特异性?

1. 首先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。 2. RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。 3. 为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。 4. 使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。 5. 若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。 6. 设计引物时,避免在引物3’端含有 …

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qPCR试剂对比2

上图为engreen的qPCR试剂,通过对比,可以发现engreen的qPCR试剂不会出现NTC扩增产物,特异性更高。

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如何提高qPCR反应的灵敏度与特异性?

首先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。 RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。 为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。 使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。 若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。 设计引物时,避免在引物3’端含有互补序列,避免形成内部发卡结构。 可 …

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