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电穿孔(电转染)

HepG2细胞的电转染条件是什么?

使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时HepG2细胞的电转染条件是: 对于0.2 cm电转杯,细胞密度为5×10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为170V, 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯,细胞密度为5×10^6 cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为250 …

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Hela细胞的电转染条件是什么?

使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是: 对于0.2 cm电转杯,细胞密度为3×10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为130V, 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯,细胞密度为3×10^6 cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为250μ …

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电转染实验时,siRNA有什么要求?

       使用高纯度、无菌的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。建议在250-750nM最终浓度范围内的进行siRNA不同浓度的梯度实验。建议设置一个非靶向或无意义的siRNA对照序列,以验证实验siRNA的特异性。同时也验证,针对单个基因用多个siRNA序列实验产生的表型是否是由于脱靶 …

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电转染实验时,对于方波形式的脉冲条件是什么?

       一般来说,方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定,即在保持电容不变的情况下,将脉冲长度减半,电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件,可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。当使用0.4cm电转杯时 …

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电转染实验时,DNA有什么要求?

        使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素,OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA,因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围为1-5 mg/ml。使用浓度较高的DNA可能会导致与细胞不 …

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电穿孔实验时的细胞密度是多少?

       确定每种细胞类型的最佳细胞密度,以使电穿孔效率最大化。在含电转试剂的终体系中,电穿孔时的细胞密度一般在1-10×10^6细胞/ml范围内。对于悬浮细胞,最好是接近10×10^6细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞,建议的细胞密度为1-5×10^6细胞/ml。 如需了解更多关于电转染试剂的信息,请点击https://www.engreen.com …

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电转染后细胞孵育时间是多少?

       每种细胞类型电转染后有最佳孵育时间。对于质粒的电转染,最佳孵育时间一般为12-48小时,具体最佳时间需根据实验目的、质粒性质和表达蛋白的半衰期进行调整。 如需了解更多关于电转染试剂的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/efficient-electroporation

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细胞电转染实验效率低的原因是什么?

细胞电转染实验效率低的原因一般有以下几点: 1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d …

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