英格恩技术博客 专注转染等实验
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DNA转染

DNA转染(Entranster)与镰刀菌细胞毒性研究

          在自然界中,微生物镰刀菌病原体普遍侵入宿主植物、动物和人类,并且共生次生代谢物真菌毒素。除农业经济损失外,以脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)为例,这些物质通常是对食品安全、动物和人类健康带来严重威胁。虽然全世界对食品中DON阈值的许多规定都是严格立法的,但DON对婴儿、青年和老年人群的毒性和安全限度仍存在相当大的争议,这实际上是由于对DON毒 …

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DNA转染(Entranster)与5-羟色胺和非酒精性脂肪性肝病研究

         非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是世界范围内最常见的肝脏疾病之一,它由单纯性脂肪变性发展为炎性非酒精性脂肪性肝炎(NASH),在某些情况下甚至发展为肝硬化或肝细胞癌。NAFLD与2型糖尿病(T2DM)相关。在NAFLD中,肝脏发生过量脂质合成(ELS),主要包括新的脂肪生成和三酰甘油(TG)以及极低密度脂蛋白(VLDL)的合成,导致脂质积聚 …

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细胞转染应该什么时候加抗生素?

细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源核酸不整合到宿主染色体中,在短时间内在基因或蛋白水平产生较高的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。稳定转染是相对需要建立某些基因整合到染色体DNA的细胞系来说的,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B 磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选, …

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如何选择稳定转染的筛选抗生素?

稳定转染和瞬时转染,细胞转染的步骤基本相同,只是在转染后的细胞处理会不一样。由于瞬时转染只能维持几天,故在转染12~72后就可以在蛋白或基因水平进行相应的检测了。稳转细胞系通常需要通过一些选择性标记反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。 通常构建的载体上有两个抗性基因,如,氨苄青霉素和新霉素。那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来筛细胞呢? 很多真核表达质粒上都 …

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细胞转染为什么不能加血清?

看过很多细胞转染的高手,在做真核细胞转染时,都是在把核酸和转染试剂的混合液加入细胞表面以前,将融合的细胞的含血清的培养液弃去,用无血清培养基清晰后再加入混合物,4-6h后再换含血清的培养基。这是为什么呢?为什么这些转染试剂要求不含血清呢? 传统的转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如,阳离子脂质体。带正电的脂 …

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转染用的质粒,你提对了吗?

老板天天催着要实验进展,是不是很郁闷?可是细胞不给力,是不是很忧郁?刚刚复苏的细胞长的挺好的,可是转染后,细胞状态莫名其妙就变差了,是不是很伤心?转染试剂毒性大,换转染试剂?结果还是一样,是不是很无奈?勉强收了一点点细胞,可是还不够做个western blot的,是不是很抓狂?实验总是不能顺利进行,找不到原因,是不是都要吐血了?没人给指点迷津,是不是心都要碎 …

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为什么磷酸钙转染并不稳定?为什么磷酸钙转染并不经济?

常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。后者外源DNA 既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。 转染技术的选择对转染结果影响也很大。磷酸钙转染技术是 …

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G418筛选转染克隆的注意事项

G418作为稳定转染通用的一种筛选方式,在进行筛选前应该要注意几点: 1.    G418的浓度:G418是一种氨基糖苷类似物,它通过干扰核糖体功能来阻止哺乳动物细胞蛋白质的合成。因此在筛选过程中G418的浓度将对转染细胞的筛选产生很大的影响。在筛选之前最好进行条件优化确定最佳筛选浓度。尽管文献有报道筛选浓度,最好还是要自己亲自做一下筛选浓度的确定。 2.  …

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