英格恩技术博客 专注转染等实验
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细胞转染

细胞转染可以加血清吗?

传统的转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如,阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响转染效率。另外,使用脂质体等转染试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,导致转染 …

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Hela细胞转染后几小时内死亡是什么原因?

可能有多种原因: 目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡; 转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害; 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议: 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统; 摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考 …

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RNA转染影响因素

转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明,因为RNA …

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如何达到较高的RNA转染效率?

可从以下几方面进行优化: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如 …

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为什么我的细胞电转染实验做不好?

要想做好细胞的电转染实验,应注意以下几点: 1.   选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.   选择合适的细胞 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内 …

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如何达到更好的siRNA转染效率?

为了达到高的转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点: 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …

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细胞转染效率低下的几个陷阱

细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱,望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细 …

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RNA转染实验注意事项

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …

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电转染实验过程中易出现的问题

不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定 …

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质粒DNA细胞转染注意事项

质粒的构建:启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如 …

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