英格恩技术博客 专注转染等实验
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病毒转染

如何解决病毒感染细胞效率低的难题?

     病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 每1ml的培养基中加入5-10ul的Polybrene(储存液浓度为2mg/ml ),可以提高效率约3-5倍。不过病毒感染效率的问题都是相对的,达到自己的研究目的即可。      病毒感染 …

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慢病毒感染与PD-1和嵌合抗原受体修饰的T细胞抗肿瘤功能研究

       嵌合抗原受体修饰的T(CAR-T)细胞对血液恶性肿瘤具有很强的抗肿瘤活性。然而,将这一成功转化为实体瘤仍然令人沮丧。在实体瘤的治疗中,CAR-T治疗面临着免疫抑制环境等巨大困难。在抑制环境的建立中,程序性死亡因子-1(pd-1)/程序性死亡因子配体1(pd-l1)轴被认为起关键作用。现分享一篇慢病毒感染(envirus)与PD-1和嵌合抗原受体 …

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慢病毒转染表达载体

       慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成,即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建,能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白;载体成分则与包装成分互补,即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列,同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。 …

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病毒感染细胞实验效率低怎么办?

病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 每1ml的培养基中加入5-10ul的Polybrene(储存液浓度为2mg/ml ),可以提高效率约3-5倍。不过病毒感染效率的问题都是相对的,达到自己的研究目的即可。     病毒感染细胞本来效率就较低,整个过程相对复杂难操作,一般一次花费周期至少两三个月,多则几个月到十几个 …

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慢病毒感染贴壁细胞实验方法

1、 慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×105/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×105/孔左右。 2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。 3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释polybrene。 4、继续培 …

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慢病毒感染与可溶性程序性死亡1蛋白和类风湿关节炎研究

类风湿性关节炎(RA)是一种关节炎症性疾病,其特征是慢性滑膜炎、进行性侵蚀和软骨破坏,导致关节变形和疼痛以及关节功能丧失。RA影响全世界0.5-1%的成年人,每年每100000人中诊断出有5_50人患有该病,而且在女性和老年人群中的发病率也更高。如果未经治疗,风湿性关节炎可能导致关节损伤、残疾和生活质量下降,此外还有心血管疾病和其他的并发症。该病的确切病因尚 …

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提高慢病毒感染细胞效率的方法

可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率,下面以慢病毒为例,说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的EnvirusTM-LV用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成EnvirusTM-LV稀释液。4℃静置5 …

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如何提高病毒感染实验效率?

可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率,下面以慢病毒为例,说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的EnvirusTM-LV用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成EnvirusTM-LV稀释液。4℃静置5 …

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慢病毒载体构建原理

慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成,即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建,能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白;载体成分则与包装成分互补,即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列,同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转染包装细胞,即可在细 …

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